Das Haarwachstum ist biologisch, biochemisch sehr komplex. Zunächst gibt es vier Wachstumsphasen.

“Der Haarzyklus besteht aus vier Hauptphasen: Anagen, Katagen, Telogen und Exogen. Anagen ist eine Phase mit hoher Zellteilung, die durch die Bildung eines Haarschafts aus dem Haarfollikel gekennzeichnet ist, während Katagen und Telogen den Rückgang bzw. die Ruhephase des Follikels beschreiben, was letztendlich zum Haarausfall führt. Während sich zu jedem Zeitpunkt 9 % der Haarfollikel in der Telogenphase befinden, begünstigen verschiedene Faktoren den Übergang von Anagen zu Telogen, darunter Entzündungen, Hormone, Stress, Nährstoffmangel, schlechte Schlafqualität und Medikamente, die die Zellteilung hemmen. Umgekehrt fördern eine erhöhte Durchblutung, die direkte Stimulation des Haarfollikels und Wachstumsfaktoren den Übergang von der Telogen- in die Anagenphase und das anschließende Haarwachstum.”1

Schematische Darstellung des Haarwachstumszyklus und der Faktoren, die den Übergang von der Anagen- zur Telogenphase bzw. von der Telogen- zur Anagenphase beeinflussen können.2

Viele Signalwege beeinflussen das Haarwachstum, daher können auch so viele Faktoren zu Haarausfall und schlechter Haarqualität führen.

“Mikroumgebungsfaktoren, die Haarfollikel-Stammzellen (HFSCs) während des Übergangs von der Telogen- zur Anagenphase regulieren. (Links) Späte und verstärkte Telogenphase: Eine hohe BMP-Signalübertragung (Bone Morphogenetic Protein) und eine geringe Gas6-Expression halten die HFSCs in einem Ruhezustand. Erhöhte Corticosteronspiegel, die mit Stress in Verbindung stehen, verlängern die Telogenphase. (Mitte) Frühes Telogen: BMP4, BMP6 und FGF18 aus Fibroblasten, Adipozyten und DP-Zellen (dermale Papille) erhalten die Ruhephase aufrecht, während Makrophagen Oncostatin M sekretieren und so die Aktivität der HFSC modulieren. (Rechts) Spätes Telogen bis frühes Anagen: Gas6 nimmt zu, während die BMP-Signalübertragung abnimmt, was die Aktivierung der HFSC fördert. Weitere Faktoren wie TGFβ2, die Wnt-Aktivierung, FGF7 und FGF10 tragen zur BMP-Hemmung und zum Wiedereinstieg in den Haarzyklus bei. Diese Abbildung verdeutlicht die systemischen (Corticosteron) und lokalen (BMP, Gas6, FGF, Wnt) Faktoren, die das Schicksal der HFSC und die Regeneration der Haarfollikel bestimmen (modifiziert nach Quist et al.3).”4

Haarfollikel-Stammzellen verbleiben im Ruhezustand (Telogen), solange BMP-Signale und stressbedingtes Corticosteron überwiegen, während Gas6 und Wnt-Signale den Übergang zum Wachstum (Anagen) einleiten. Das Haarwachstum wird durch eine Feinabstimmung lokaler Signale aus der Mikroumgebung und systemischen Stressfaktoren gesteuert, die den Übergang zwischen Schlaf- und Wachphase der Stammzellen regulieren.

Wichtig zum Verständnis, warum Methylenblau Haare sprießen lässt ist β-Catenin.

5

Wnt/β-Catenin Signalweg

“Der Wnt/β-Catenin-Signalweg spielt eine Schlüsselrolle bei der Regulierung der Haarfollikelentwicklung und des Haarwachstums. Insbesondere ist der kanonische Wnt/β-Catenin-Signalweg entscheidend für die Regulation der Haarfollikelstammzellen (HFSCs) ⁵⁵ Eine anhaltende β-Catenin-Expression in HFSCs im Haarkeim und im Haarbulge aktiviert den LEF/TCF-Komplex und fördert die Transkription nachgeschalteter Zielgene wie c-Myc und Cyclin D1. Dies verstärkt die Aktivierung, Proliferation und regulierte Differenzierung der HFSCs während der Haarregeneration. ⁶³ Der Wnt/β-Catenin-Signalweg gilt als Haupttreiber für den Übergang der Haarfollikel von der Ruhephase in die Wachstumsphase und ist an allen Stadien der Haarfollikelentwicklung beteiligt.^63,64 Obwohl sie evolutionär sehr alt sind, sind viele Komponenten des Wnt-Signalwegs für das Zellwachstum, die Proliferation und die normale Gewebereparatur unerlässlich.^65,66”6

Den Signalweg findet man bei DocCheck im Bereich Onkologie, weil er da auch eine Rolle spielt, als Übersichtsbild:

7

Kurzum, der der Wnt/β-Catenin-Signalweg reguliert und kontrolliert Zellteilung. Wird er in einem Tumor aktiviert, also auch ohne Liganden, teilen sich Tumorzellen. Der Wnt/β-Catenin-Signalweg ist also ein ganz zentraler Signalweg in den Zellen.

Methylenblau schützt die Stammzellen der Haarfollikel vor oxidativem und metabolischem Stress und fördert so die Haarregeneration

Methylenblau wurde früher bereits zum Färben von Haaren verwendet, um den Rotstich zu unterdrücken.

Ein interessantes, neues Paper untersucht den Effekt von Methylenblau auf die Haarfollikelstammzellen und somit das Haarwachstum:

Sadashivaiah, K., Xue, H., & Cao, K. (2026). Methylene blue protects hair follicle stem cells from oxidative and metabolic stress to enhance hair regeneration. Aging. https://www.aging-us.com/article/206376/text#abstract

Haarfollikel-Stammzellen (HFSCs) sind für die Aufrechterhaltung des Haarwachstums und der Regeneration von entscheidender Bedeutung. Ihre Funktionsstörung, die häufig durch oxidativen Stress oder ein metabolisches Ungleichgewicht verursacht wird, führt zu Haarausfall und zur Alterung der Kopfhaut. β-Catenin ist ein Schlüsselprotein im Wnt-Signalweg, und seine Aktivität ist entscheidend für die Erhaltung und Regeneration der HFSCs. In dieser Studie zeigen wir, dass Methylenblau (MB), ein auf die Mitochondrien gerichtetes Antioxidans, die Proliferation und Lebensfähigkeit von HFSCs fördert, indem es sowohl reaktive Sauerstoffspezies (ROS) reduziert als auch den β-Catenin-Signalweg aktiviert. Funktionstests zeigten, dass MB die Wundheilung in HFSC-Kulturen signifikant beschleunigte, was auf eine gesteigerte Regenerationsfähigkeit hindeutet. Obwohl die gleichzeitige Behandlung mit Antioxidantien wie Vitamin A und C die ROS-Beseitigung verbesserte, reduzierte sie überraschenderweise die durch MB induzierte β-Catenin-Aktivierung.

Methylenblau fördert also die Follikelstammzellen zum einen, dass es reaktive Sauerstoffspezies abfängt als auch damit, dass es den Wnt/β-Catenin-Signalweg in den Follikelstammzellen aktiviert, sie also zu Zellteilung anregt.

Erst einmal hat man geschaut, ob Methylenblau vielleicht die Stammzellen selbst irgendwie beeinflusst oder verändert.

Eine Behandlung mit Methylenblau (MB) hat keinen Einfluss auf die Stammzellcharakteristika oder den Zellzyklusverlauf in menschlichen Haarfollikelstammzellen (HFSCs). (A) Repräsentative Immunfluoreszenzaufnahmen, die die CD34- und K15-Expression in Kontroll- (scheinbehandelten) und mit MB behandelten HFSCs zeigen (Maßstab: 10 μm). (B) Repräsentative Western-Blot-Analyse der CD34- und K15-Proteinkonzentrationen in Kontroll- und MB-behandelten HFSCs. (C) Quantifizierung der CD34- und K15-Bandintensitäten, normiert auf β-Aktin, basierend auf zwei unabhängigen biologischen Replikaten. ns: nicht signifikant. (D) Durchflusszytometrische Analyse der Zellzyklusverteilung, die vergleichbare Anteile an HFSCs in den Phasen G0/G1, S und G2/M zwischen der Kontrollgruppe und der mit MB behandelten Gruppe zeigt (N = 3). ns: nicht signifikant.

Die Haarfollikel-Stammzellen selbst werden weder verändert noch sonst irgendwie beeinflusst.

Die MB-Behandlung reguliert die β-Catenin-Signalübertragung in HFSCs hoch. (A) Wachstumskurve von Kontroll- und MB-behandelten HFSCs über 12 Tage, die eine verstärkte Proliferation nach MB-Behandlung zeigt, bestimmt durch manuelle Zellzählung. (B) Zellviabilität von Kontroll- und MB-behandelten HFSCs am Tag 15, bewertet mittels XTT-Assay. (*** p < 0,0001). (C) Intrazelluläre ROS-Konzentrationen in Kontroll- und MB-behandelten HFSCs am Tag 15, bestimmt durch DCFDA-Färbung und quantifiziert mittels Durchflusszytometrie. (** p < 0,0001) (D) Repräsentative Immunoblots der Expression von Gesamt- und aktivem β-Catenin in Kontroll- und MB-behandelten HFSCs am Tag 15. (E) Die densitometrische Quantifizierung des Verhältnisses von aktivem zu Gesamt-β-Catenin zeigt einen signifikanten Anstieg nach MB-Behandlung. (**** p < 0,0001).

Irgendwie schafft es Methylenblau dass es mehr aktives β-Catenin in Haarfollikel-Stammzellen gibt.

Der Hauptunterschied zwischen aktivem und inaktivem β-Catenin liegt in seinem Phosphorylierungsstatus an bestimmten Aminosäuren, welcher darüber entscheidet, ob das Protein abgebaut wird oder in den Zellkern wandern kann. Es gibt Antikörper, die exakt und ausschließlich an die unphosphorylierte Form binden. Zeigt der Antikörper ein Signal, ist aktives β-Catenin vorhanden.

Die Phosphorylierung ist im DocCheck Übersichtsbild der orange hinterlegte P. Aktives β-Catenin ist an spezifischen Stellen ohne das P.

Methylenblau führt also irgendwie zu einer Dephosphorylierung des β-Catenin.

Wenn kein Wnt-Signal vorliegt, ist β-Catenin inaktiv. Sobald ein Wnt-Signal an der Zelloberfläche andockt, wird der Zerstörungskonplex, der β-Catenin abbaut blockiert. Das Protein bleibt dephosphoryliert (aktiv). Das aktive β-Catenin reichert sich im Zytoplasma an und wandert (translokiert) in den Zellkern. Im Kern bindet es an Transkriptionsfaktoren und schaltet die Gene an, die den Haarfollikel aus dem Ruhezustand (Telogen) in die Wachstumsphase (Anagen) zwingen.8

Entweder gibt Methylenblau ein Wnt-Signal oder es wirkt weiter oben in der Singnalkette, damit ein Wnt-Signal ausgelöst wird.

Methylenblau beschleunigt den Wundverschluss in HFSC-Monolayer-Kulturen. (A) Repräsentative Aufnahmen von Scratch-Assays bei Kontroll-HFSCs und mit MB behandelten HFSCs 0, 4, 18, 24, 36 und 48 Stunden nach der Wundbildung. (B) Die quantitative Analyse der Wundfläche zeigt einen signifikant schnelleren Wundverschluss bei den mit MB behandelten Zellen, was auf eine verbesserte Migration und Proliferation hindeutet.

Man nimmt Zellkultur, die dicht gewachsen ist, kratzt mit der Pipette einen Graben zwischen die Zellen, und schaut, wie lange es braucht, bis der Graben wieder überwuchert ist. MB führt dazu, dass dieser Graben im Zellrasen sich schneller schließt. Die Zellen teilen sich also häufiger mit MB als ohne.

Die einzelnen und kombinierten Wirkungen von MB, Vitamin A (Vit. A) und Vitamin C (Vit. C) auf die β-Catenin-Expression in HFSCs. (A) Repräsentative Immunoblots von Gesamt- und aktivem β-Catenin in HFSCs, die 15 Tage lang in den Gruppen „Kontrolle“, „MB (100 nM)“, Vit A (100 nM), MB (100 nM) + Vit A (100 nM), Vit C (100 μM) sowie MB (100 nM) + Vit C (100 μM) behandelt wurden. (B) Die densitometrische Quantifizierung der Verhältnisse von aktivem zu Gesamt-β-Catenin aus (A) zeigt einen signifikanten Anstieg nach einer alleinigen MB-Behandlung. Weder Vit A noch Vit C, allein oder in Kombination mit MB, verstärken die β-Catenin-Aktivierung über die MB-Behandlung hinaus. Bemerkenswert ist, dass die β-Catenin-Aktivierung in den Gruppen MB + Vit A und MB + Vit C teilweise unterdrückt wird. (***p < 0,0001).

Der Wachstumseffekt liegt nur am MB und nur am MB allein. Gibt man Vitamin A oder Vitamin C dazu, wird der Effekt kleiner. In Zellkultur sind Vitamin A und Vitamin C also schlechter für das Wachstum, was daran liegen kann, dass Methylenblau dann in seine nicht mehr so aktive Leuko-Form überführt wird (die grüne Variante).

Die Kopfhaut und die Haarfollikel sind ständig ultravioletter (UV) Strahlung ausgesetzt, die oxidativen Stress, DNA-Schäden und eine vorzeitige Alterung der follikulären Stammzellen verursachen kann [11].

Herkömmliche Sonnenschutzmittel verwenden hauptsächlich anorganische Filter wie Zinkoxid und Titandioxid oder chemische Absorber wie Oxybenzon, die UV-Licht in der Hornschicht reflektieren oder absorbieren, jedoch keinen Schutz bieten, sobald die UV-Photonen die Epidermis durchdrungen haben [9, 33]. Daher wächst das Interesse an der Identifizierung bioaktiver Verbindungen, die UV-bedingte oxidative Schäden in der Haut neutralisieren können, anstatt die Strahlung lediglich äußerlich zu reflektieren. MB ist ein Wirkstoff, der ursprünglich im Jahr 1876 synthetisiert und von der FDA für medizinische Zwecke zugelassen wurde [9, 34]. Es wirkt als mitochondriengebundenes Antioxidans mit gut dokumentierter Wirksamkeit bei der Umkehrung von Alterungserscheinungen sowohl in Progerie-Zellen als auch in normalen menschlichen Hautzellen. Frühere Untersuchungen von uns und anderen haben gezeigt, dass MB dermale Fibroblasten vor UVB-induzierten DNA-Schäden schützt, die Mitochondrienfunktion verbessert und die Kollagenproduktion steigert [2, 10, 35]. Diese Eigenschaften, zusammen mit der natürlichen Fähigkeit von MB, UV-Licht im Bereich von 550–700 nm zu absorbieren, machen es zu einer neuen intrazellulären UV-blockierenden Verbindung. Bei dünnem Haar, bei dem die Kopfhaut direkt dem Sonnenlicht ausgesetzt ist, bietet MB eine biologische Schutzschicht, die zusätzlich zu herkömmlichen Sonnenschutzmitteln wirkt, indem sie oxidativen Stress reduziert, die Gesundheit der Stammzellen schützt und die Regenerationsfähigkeit der Kopfhaut unterstützt. Zusammengenommen machen diese Eigenschaften MB zu einem hervorragenden Wirkstoff zur Förderung der Kopfhautgesundheit.

Neben dem Schutz der Kopfhaut konnten wir zudem nachweisen, dass MB die durch ROS verursachten Zellschäden in HFSCs reduziert. Wir zeigten außerdem, dass MB die Proliferation von HFSCs fördert und möglicherweise das Potenzial besitzt, Wundheilungsprozesse zu unterstützen, wahrscheinlich durch die Aktivierung von β-Catenin. Um die kombinierte antioxidative Wirkung von MB zu bewerten, haben wir es mit den Vitaminen A und C kombiniert, zwei bekannten ROS-Fängern. Allerdings aktivierte ausschließlich MB den Wnt/β-Catenin-Signalweg, der für die Proliferation, Erhaltung und Haarregeneration von HFSCs entscheidend ist. Im Gegensatz dazu hat unter denselben Bedingungen weder Vitamin A noch Vitamin C positive Auswirkungen auf den Wnt/β-Catenin-Signalweg. Überraschenderweise schwächte die gleichzeitige Behandlung mit Vitamin A oder C die durch MB induzierte β-Catenin-Aktivierung in HFSCs ab. Tatsächlich ist bekannt, dass Vitamin-A-Derivate (Retinoide) den β-Catenin-Signalweg unterdrücken, indem sie dessen Phosphorylierung und Abbau durch Wechselwirkung mit dem Retinsäure-Rezeptor fördern [36]. Gleichzeitig hat Vitamin C komplexe, kontextabhängige Wirkungen: Je nach Zelltyp und Zustand hemmt oder aktiviert es den Wnt/β-Catenin-Signalweg. MB induzierte hingegen eine anhaltende β-Catenin-Aktivierung, verbunden mit einer erhöhten Proliferation der HFSCs und einer gesteigerten Wundheilungsfähigkeit. Dies unterstreicht die einzigartige Doppelfunktion von MB: Es reduziert nicht nur oxidativen Stress wie herkömmliche Antioxidantien, sondern stimuliert auch die regenerationsfördernde β-Catenin-Signalübertragung – eine Eigenschaft, die Retinoiden (Vitamin A) und Vitamin C entweder fehlt oder der sie entgegenwirken.

Über seine intrinsische Bioaktivität hinaus verbessert MB auch die Wirksamkeit bestehender Haarwuchsmittel. Minoxidil, ein blutdrucksenkendes Medikament, das nach seiner unerwarteten Verbindung mit Hypertrichose für die topische Anwendung neu formuliert wurde, wird seit langem zur Behandlung der androgenetischen Alopezie und zur Förderung des Haarwachstums eingesetzt [22, 37, 38]. Jüngste Studien zeigen, dass Minoxidil den Wnt/β-Catenin-Signalweg in Zellen der dermalen Papille aktiviert, was mit unserer Beobachtung übereinstimmt, dass Minoxidil die β-Catenin-Aktivierung in HFSCs erhöht (Abbildung 5). Bezeichnenderweise verstärkte die gleichzeitige Behandlung mit MB diesen Effekt deutlich, was auf eine synergistische Wechselwirkung hindeutet, die die Stammzellproliferation und Signalübertragung bereits bei niedrigeren Wirkstoffdosen fördert und so möglicherweise häufige Nebenwirkungen von Minoxidil – wie Kopfhautirritationen, Schuppen oder unerwünschten Körperhaarwuchs [23, 39] – bei geringerer Wirkstoffbelastung reduziert.

[…]

Die in dieser Studie verwendeten Konzentrationen liegen innerhalb der etablierten Bereiche für in vitro-Experimente und dienen eher der Modellierung zellulärer Reaktionen als der Abbildung einer direkten klinischen Dosierung [32]. Es ist wichtig zu beachten, dass sich die in vitro-Dosierung nicht direkt auf physiologische Expositionswerte in vivo übertragen lässt. […]

Eine gesunde Kopfhaut bildet den unverzichtbaren „Nährboden“ für das Haarwachstum, während HFSCs als regenerative „Samen“ fungieren, die die Erneuerung der Haarfollikel und das Nachwachsen des Haares ermöglichen. Durch den Schutz der Mikroumgebung der Kopfhaut und die Unterstützung der HFSC-Funktion stärkt MB beide entscheidenden Aspekte eines gesunden Haarökosystems. Darüber hinaus können die breit gefächerten antimikrobiellen Eigenschaften von MB dazu beitragen, ein ausgeglichenes Mikrobiom der Kopfhaut wiederherzustellen, das zunehmend als Faktor bei Kopfhauterkrankungen wie Schuppen, seborrhoischer Dermatitis und atopischer Dermatitis angesehen wird [40–42]. Diese Erkenntnisse positionieren MB als ein vielseitiges Molekül, das die Kopfhaut und die Haarfollikel schützt, herkömmliche Behandlungen wie Minoxidil ergänzt und die HFSCs vor metabolischen und pharmakologischen Belastungen abschirmt, wodurch ein widerstandsfähiges, gesundes Kopfhautmilieu gefördert wird.

Bei schütterem Haar eine gute, einfache Methode, um das Haarwachstum vielleicht positiv zu beeinflussen.

ABER, da der Wnt/β-Catenin-Signalweg sehr wichtig in der Embryogenese ist, ein weiteres Paper, das darauf hinweist, dass Methylenblau in der Schwangerschaft nicht genommen werden sollte, weil es in die Zellteilungssignalwege des Embryo eingreifen könnte. Dass MB von der Mutter auf das Kind übertragen und auch verstoffwechselt wird, ist seit über 100 Jahren bekannt und dokumentiert.

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CAS = Chemical Abstracts Service ist ein internationaler Bezeichnungsstandard für chemische Stoffe. Die CAS Nummer ist eindeutig einer Substanzvariante zugewiesen. Jede Chemikalie hat somit eine oder mehrere CAS Nummer. Es gibt keine Chemikalien ohne CAS Nummer, sonst könnte man sie gar nicht bestellen.

Methylenblau hat drei CAS Nummern.

Von der CAS Nummer zu unterscheiden ist die ECHA-Nummer, die etwas über die Registrierung in der EU aussaugt. 1 Nicht in der EU registrierte Chemikalien (wie die Lipide der Plörre), fehlt die ECHA-Nummer (auch EG-Nummer genannt). Die ECHA-Nummer ist ein siebenstelliger Identifikator, der von der Europäischen Chemikalienagentur (ECHA) zur eindeutigen Kennzeichnung von Stoffen unter REACH/CLP vergeben wird. Die ECHA Nummer ist nur eine Europäische Sonderwurst und im Rest der Welt irrelevant. Man such Chemikalien immer anhand der CAS.

Eine Pharmacopeia (deutsch: Pharmakopöe oder Arzneibuch) ist ein amtliches, gesetzlich verbindliches Nachschlagewerk, das Qualitätsstandards für Arzneimittel und deren Inhaltsstoffe festlegt.

Die am häufigsten referenzierten Parmacopeias sind

1. Ph. Eur. (European Pharmacopoeia): Herausgegeben vom EDQM (Europarat), verbindlich in 39 europäischen Staaten.

2. USP (United States Pharmacopeia): Das Standardwerk der USA mit globaler Vorbildfunktion.

3. JP (Japanese Pharmacopoeia): Das offizielle Arzneibuch Japans.

Die Lipide der Plörre sind weder USP, noch PH. Eur oder JP weil es da noch gar keine USP Vorgaben gibt. Bei USP ist man aktuell in der dritten Runde des diskutierens.2

Für Methylenblau gibt es folgende drei CAS Nummern.

61-73-4: C16 H18 Cl N3 S, MW: 319.85

122965-43-9: C16 H18 N3 S. Cl.xH2O

7220-79-3: Methylene Blue Trihydrate, C16 H18 N3 S . Cl . 3 H2 O, MW: 373.898

Die CAS allein reicht, die Chemikalie online/im Katalog zu finden. Das ist auch der Sinn dieser Nummer.

Die ECHA Nummer lautet:

97130-83-1: C16 H18 Cl N3 S, MW: 319.852

Die CAS Nummer sind unterschiedliche, weil es Methylenblau mit unterschiedlichen Mangen an Kristallwasser gibt.

Kristallwasser ist Wasser, das in die feste Kristallstruktur eines Stoffes eingebaut ist. Es handelt sich dabei nicht um „Feuchtigkeit“ (wie bei einem nassen Schwamm), sondern um Wassermoleküle, die in einem festen Zahlenverhältnis fest mit den Ionen oder Molekülen des Stoffes verbunden sind. Man hat es somit biologisch auch mit Grenzflächeneffekten oder “informiertem” Wasser zu tun.

Methylenblau gibt es ohne Kristallwasser und mit zwei verschiedenen Mengen an Kristallwasser. Methylenblau ohne Kristallwasser ist am günstigsten, das mit Kristallwasser ist deutlich teurer.

Methylenblau ist also immer Methylenblau, nur eben mit oder ohne Kristallwasser.

Wichtig ist nur eines: Die Substanz muss nach

a) USP oder

b) Pharmacopeia EU oder

c) japanese Pharmacopeia oder

d) nach den Vorgaben irgend einer andere Pharmacopeia irgendwo auf der Welt hergestellt sein. Es gibt dabei keine nationalen Grenzen, es muss nur angegeben sein, auf welches Arzneimittelhandbuch man sich bezieht.

USP Reinheit bezieht sich dabei jeweils auf die chemische Substanz, nicht auf den Hersteller. Für die Begutachtung einer Firma sind die jeweiligen Behörden wie FDA oder EMA zuständig, das sollte man unterscheiden können. Fällt eine Firma durch eine FDA Begutachtung wird ein Form 483 herausgegeben. Aber selbst eine Form 483 hat aktuell kaum Folgen für die betroffene Firma, wenn sie schwört, das Problem nach bestem Wissen und Gewissen zu beheben.

USP bedeutet einfach nur, dass eine Substanz nach den Reinheitsvorschriften der americanischen Pharmacopeia hergestellt wurde und nicht nach jenen der japanischen oder europäischen Pharmacopeia.

Nicht USP, Ph. Eur oder JP Chemikalien sind reine Laborchemikalien und NICHT für die Anwendung in Lebewesen geeignet. Nicht USP Methylenblau ist nur zum färben von Stoffen oder zum Mikroskopieren geeignet!

Ob das Methylenblau somit mit oder ohne Kristallwasser ist, ist chemisch vollkommen unerheblich, solange es sich um eine Arzneimittelbuchvariante handelt. Biologisch jedoch wurde mir mehrfach berichtet, dass das Methylenblau mit Kristallwasser besser wirken würde.

Beim Einwiegen muss man jedoch darauf achten, dass man bei molaren Berechnungen das Kristallwasser mit berechnet.

Mit oder ohne Kristallwasser kann die Löslichkeitseigenschaften und Verarbeitungseigenschaften einer Substanz beeinflussen. Es kann also biologisch-chemische oder verfahrenstechnische Gründe geben, eine Variante zu bevorzugen.

Methylenblau in Wasser aufzulösen ist theoretisch denkbar einfach, das kann jeder (der danach damit leben kann, dass die elektrostatischen Partikel anschließend irgendwo, Tage später, in der Wohnung auftauchen können und blaue Flecken hinterlassen). Jedem steht es frei, sich entsprechendes Methylenblaupulver nach USP oder Pharm. EU. zu kaufen, mit einer Feinwaage einzuwiegen, sich die Flaschen zu kaufen und anschießend die Flecken zu schrubben.

Das Erstellen einer 1% Lösung lernt man in der Schule im Chemieunterricht. Vor 100 Jahren wurden auch 2% Lösungen verwendet, daneben auch Kapseln oder Oblaten.

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In der Deutschen Tiermedizinischen Wochenschrift 1926? fand sich eine Kurznachricht über einen Artikel, der 1924 wohl in der Zeitschrift für Veterinärkunde1 erschienen ist. Der Band von 1924 ist leider nicht digital online verfügbar.

Ob Methylenblau auf bei Menschlichen Würmen als Entwurmungsmittel wirkt, habe ich bisher keinerlei Daten gefunden.

Versuche mit Methylenblau als Anthelminikum

Vom Oberveterinärrat Dr. Fischer.

(Zeitschrift f. Veterinärk. 1924, H. 1.)

FISCHER wählte zu Versuchen mit dem genannten Mittel, das im Gegensatz zu den gebräuchlichsten Wurmmitteln für Pferde (Brechweinstein und Arsenik) völlig unschädlich ist, 35 Pferde aus dem Bestande von drei Eskadrons aus, die den Verdacht auf Darmparasiten aufkommen ließen. Der Kot von diesen Pferden wurde nach der Methode von SCHUHMANN-KIEFFER (vergl. B. T. W. 1922, Nr. 31) untersucht und in allen Proben Eier von Strongylusarten, und zwar meistens von Strongylus bidentatus vulgaris, sehr häufig gemischt mit Strongylus edentatus, seltener die von Sklerostomum tetracanathum gefunden. Eier von Ascaris Megalocephala kamen 6mal zur Beobachtung, darunter bei 2 Pferden in größerer Anzahl.

Alle Pferde wurden mit Methylenblau durch behandelt und es lässt sich zusammenfassend sagen: Das Methylenblau ist ein mildes, für die Gesundheit der Pferde völlig unschädliches Wurmmittel, das in entsprechender Menge (etwa 4 g) täglich verabreicht in 3-5 Tagen eine bemerkenswerte Besserung der Parasiteninvasion gewährleistet. Seine Wirksamkeit gegenüber Askariden ist im allgemeinen günstiger zu veranschlagen als gegenüber den Sklerostomen, zu deren Beeinflussung eine längere Darreichung notwendig erscheint. Wegen seiner Ungefährlichkeit würde es wohl in erster Linie als Anthelmintikum bei Fohlen in Frage kommen.

Carola war so nett durch alte Tiermedizinische Zeitschriften zu gehen und mir Fotos und Scans zu schicken und da sind weitere alte Schätzchen dabei: Methylenblausilber wurde 1926 auch an Tieren getestet.

Es ist aber nun mal so, dass Tiere auf verschiedene Substanzen anders reagieren als Menschen. Beispiele dafür sind Xylit oder Schokolade bei Hunden, oder Lauch- und Zwiebelgewächse bei Katzen.

Methylenblau ist intravenös giftig für Frösche4 aber nicht für Katzen5 oder Menschen. Die LD50 einer Substanz (also die Dosis, bei der die Hälfte der Tiere an einer Chemikalie verstirb) sagt somit nur sehr bedingt etwas über die Letalität beim Menschen aus, zumal Ratten Nagetiere sind und zudem koprophag. Koprophat heißt, dass Nagetiere ihren eigenen Kot fressen, um essentielle Vitamine wie B-Vitamine, Aminosäuren und Bakterien aus dem Blinddarmkot zu gewinnen. Man kann also davon ausgehen, dass es wohl gewissen biochemische Unterschiede zwischen Nagetieren und Menschen geben sollte.

Zudem muss man unterscheiden, ob man eine Substanz isst oder injiziert. Agrochrom ist zudem nicht Methylenblau, das sind zwei komplett unterschiedliche Substanzen.

Dieses historische Publikation zeigt zwei Dinge:

1. Was für den Menschen ein Heilmittel ist, kann für Tiere tödlich sein und umgekehrt. Die Fortschrittlichste Medizin des Planeten ist die Mausmedizin. Viele Krankheiten, darunter Krebserkrankungen, können bei Mäusen geheilt werden, die Mittel funktionieren aber nicht beim Menschen.

2. Tiermodelle sind mit Vorsicht zu genießen. Nur weil ein Tier an einem Produkt verstirbt, heißt es nicht, dass es zwangsläufig gefährlich für den Menschen ist. Anders herum gilt aber das Gleiche. Nur weil ein Tier mein Mittel gut verträgt, heißt es nicht, dass es harmlos für den Menschen ist.

Diese historische Publikation ist ein seltenes Beispiel dafür, wie ein Mittel, das zu diesem Zeitpunkt in hoher Dosis im Menschen zum Einsatz kam, für Tiere tödlich war. Hätte man Argochrom erst an Tieren getestet, hätte man es für Menschen nie zugelassen.

Das heißt nicht, dass es ethisch in Ordnung ist, direkt im Menschen zu testen. Das heißt aber, dass man das Tiermodell sehr sorgfältig wählen muss und das das Tiermodell dem Menschen möglichst ähnlich sein sollte und selbst dann Rückschlüsse nur sehr bedingt getroffen werden können.

Ein Phänomen, das in der Wissenschaft bekannt ist, weswegen darüber diskutiert wird, ob man Tierversuche nicht lieber mit humanen Zellkulturversuchen ersetzen sollte.

Man kann somit von Tierversuchen nur sehr bedingt auf den Menschen schließen. Humanmedizin ist aber auch nur sehr bedingt auf Tiere übertragbar.

Tierärztliche Wochenschrift 1926, S. 527f

(Aus der medizinischen Klinik der Tierärztlichen Hochschule zu Hannover. Direktor: -Geheimer Regierungsrat Prof. Dr. Malkmus.)

Über die Wirksamkeit des Methylenblausilbers bei intravenöser Anwendung

Von Konrad Ziegler, Tierarzt aus Creuzburg (Werra)

Drucklegung des Auszuges der Inangural-Dissertation zur Erlangung der Würde eines doctor medicinae veterinariae genehmigt durch die Tierärztliche Hochschule Hannover. 1925. Referent: Geh. Reg.-Rat Prof, Dr. Malkmus. (Das Original befindet sich in der Hochschulbücherei)

Das Methylenblausilber ist eine Verbindung von Methylenblaunitrat mit Silbernitrat. Der Silbergehalt beträgt etwa 20 Prozent.

Das widerspricht leider der Originalpublikation zu Methylenblausilber.

Methylenblausilber ist ein intensiv blaues Pulver, das in Wasser leicht löslich ist, 24% Silber enthält, die färberischen Eigenschaften des Methylenblaus aufweist und kolloid ist.6 7

Die mit Hilfe des Chemikers Dr. J. Flaschen hergestellte Verbindung ist ein intensiv blaues Pulver, das in Wasser leicht löslich ist, 24 % Silber enthält, die färberischen Eigenschaften des Methylenblaus aufweist und kolloid ist.8

Ich habe Merck mehrfach angeschrieben, aber nie eine Antwort bezüglich der ursprünglichen Formulierung erhalten. Ich habe nun das Merck Firmenarchiv angeschrieben.

Sowohl kolloidales Silber als auch Silbernitrat werden in der Humanmedizin eingesetzt.9 Das Silber liegt im Falle von Silbernitrat als Ionen und nicht als kolloid vor. Hat man damals nicht zwischen Ionen und Kolloid unterschieden?

Silbernitrat besteht aus Silber- (Ag⁺) und Nitrat-Ionen (NO₃⁻). Ionen sind geladene Atome.

Kolloide sind stabile, dispergierte Partikel, die oft aus vielen Atomen bestehen und sich physikalisch anders verhalten.

Die Raman Daten10 legen nahe, dass es sich wohl eher um Silberionen gehandelt haben muss, also eine Mischung aus Silbernitrat und Methylenblau, was auch deutlich einfacher herzustellen wäre als entsprechende Mengen an Silberkolloid in fester Form, um ein entsprechendes Pulver herzustellen, denn Argochrom (Handelsname von Methylenblausilber), wurde auch als Pulver angeboten. Kolloidales Silber wird aber meist als Lösung angeboten, auch wenn ich zumindest eine Apotheke hätte, die es in Pulverform herstellen könnte.

Auch preislich macht es einen Unterschied, ob man mit Silbernitrat oder mit Silberkolloid arbeitet.

Es ist ein braunes, im auffallen den Lichte grünlich. schimmerndes Pulver, das sich im Wasser mit tiefblauer Farbe löst. Die Auflösung wird durch Erwärmung noch beschleunigt. Es wird unter dem Namen „Argochrom“ von der Firma E. Merck in Darmstadt hergestellt.

Wenn man schon dem Methylenblau allein eine starke antiseptische und entwicklungshemmende Eigenschaft auf Bakterien zuschreibt, so durfte man mit Berechtigung einer Verbindung mit Silberpräparaten, die ja ebenfalls an sich schon strenge antiseptische Eigenschaften besitzen, eine verstärkte Wirkung zumuten. Bei der überaus schnellen Ausdehnungsfähigkeit und Durchdringung des Methylenblaus gegenüber sämtlichen Körperzellen glaubte man im Sinne der Ehrlich-Wassermannschen Schienentheorie in dem Argochrom ein Mittel gefunden zu haben, das mit Leichtigkeit auf den ganzen Körper verteilt werden und überall seine keimtötende Wirkung entfalten könnte. Auf dem Gebiete der Humanmedizin will man dann auch z. T. geradezu frappante Erfolge mit Argochrom erzielt haben, besonders in Fällen septischer Allgemeininfektionen, wie z. B. bei Sepsis durch Streptokokken und Staphylokokken, bei Bakteriämie nach Aborten, bei Puerperalfieber, bei septischer Diphtherie und Abdominalthyphus. In der Veterinärmedizin habe ich nur von zwei Autoren günstige Berichte über Argochrombehandlung finden können, und zwar von Stabsveterinär Krämer bei septischer Allgemeininfektion durch Streptokokken (Druse) und von Draeske bei Hämoglobinurie der Rinder und Septikämie der Pferde.

Mir ist die Aufgabe gestellt worden, die therapeutische Wirksamkeit des Argochroms durch Tierversuche auszuprobieren, insbesondere, ob die überraschenden Erfolge bei sonst meist tödlichen Infektionskrankheiten, über die in der Humanmedizin berichtet wird, in der Veterinärmedizin bestätigt werden können. Ich verwendete dazu das Präparat in Pulverform in Packungen von 5 und 10 g, welches mir der Firma Merck bereitwilligst zur Verfügung gestellt wurde. Ich löste das Pulver in einer Konzentration von 1:100 auf, filtrierte diese Lösung, damit keine ungelösten Teile in die Vene gelangten, und verabfolgte diese nun gebrauchsfähige Lösung intravenös. Über die antiseptische und entwicklungshemmende Wirkung des Mittels auf Bakterien kann nach der ausführlichen Arbeit von Hassenkamp kein Zweifel bestehen. Es galt nun zunächst die therapeutische Dosis und Wirkung auf die einzelnen Organe, als dann die Heilwirkung bei den einzelnen Krankheiten genau festzustellen. Ich machte zu dem Zwecke zwei Gruppen von Versuchen, und zwar

A) Versuche. an. Versuchstieren zur genauen Bestimmung der Dosierung des Mittels und

B) Heilversuche an kranken Tieren.

A. Eigene Versuche

Zur Bestimmung der therapeutischen und Todesdosis benutzte ich das Argochrom in 1prozentiger Lösung. Als Versuchstiere verwandte ich in die Klinik eingelieferte, zum Töten bestimmte Hunde und-Schlachtpferde, die ein Rosschlächter mir für einige Tage zu diesem Zweck zur Verfügung stellte.

Da in der Literatur keinerlei Anhaltspunkte über die therapeutische und Todesdosis zu finden waren, machte ich zunächst einen Versuch aufs Geratewohl und verabfolgte einem 6 kg schweren gesunden Hunde 0,05 g Argochrom in 5 ccm Aqua dest., d.h. 0,008 g pro kg Körpergewicht, in die Vena saphena. Schon nach wenigen Minuten traten sehr heftige- Vergiftungserscheinungen ein, der Hund lag Platt auf der Seite, die Pupille war stark erweitert, die Lidbindehäute waren sehr blass, die Temperatur betrug 36,4 Grad C, der Puls war kaum mehr zu fühlen und nicht mehr zu zählen, der Cornealreflex völlig erloschen, das Sensorium vollkommen benommen. Unter heftigem Zittern und undefinierbaren jammervollen Lauten verendete der Hund 12 Minuten nach der Injektion. Bei den folgenden Versuchen verabfolgte ich dann ganz kleine Dosen, indem ich mit 0,001 g pro kg Körpergewicht anfing, und steigerte die Dosen. allmählich bis zur Todesdosis. Ich fand dabei folgendes:

Das Argochrom ist bei intravenöser Anwendung in 1prozentiger Lösung in Dosen von 0,001—0,002 g pro kg Körpergewicht völlig unschädlich. Es treten keinerlei Veränderungen in Bezug auf Allgemeinbefinden, Temperatur, Puls und Atmung auf. Ausgeschieden wird es zum größten Teile schon innerhalb 24 Stunden durch die Nieren. Bei einer Dosis von 0,008 g pro kg Körpergewicht tritt nach ca. 2 Std. eine kleine Temperaturerhöhung um ca. 0,3 Grad C ein, der Puls wird etwas kräftiger und beschleunigter, die Zahl der Atemzüge ändert sich nicht. Nach 6—8 Std. ist. die Temperatur wieder zur Norm zurückgesunken. Das Allgemeinbefinden bleibt während der ganzen Zeit unverändert. Im Dosen von 0,004—0,005 g Pro kg Körpergewicht erweist sich das Argochrom schon als gefährliches Gift. Nach 1/2 Std. beginnt bereits die Temperatur rapid zu steigen und erreicht nach etwa 3 Std. ihren Höhepunkt mit 41 Grad C, und darüber, fällt dann nach und nach bis 36,3 Grad C, also weit unter die Norm, zurück. Der Puls erfährt zunächst eine gewisse Stärkung, wird dann aber immer beschleunigter und matter, bis er weder genau zu fühlen noch zu zählen ist. Das Allgemeinbefinden wird gestört, das Sensorium völlig benommen; die Pupille erweitert sich sehr stark, der Blick wird trübe, der Appetit hört völlig auf. Die mit 0,004—0,005 £ pro kg Körpergewicht behandelten Hunde verendeten nach 12 bis 24 Std. Die mit obiger Dosis behandelten beiden Pferde waren zwar nach 2x24 Std. nach der Injektion am Leben, mussten dann aber geschlachtet werden, da sie wegen starker Untertemperatur (36,3 Grad C) und hochgradiger Herzschwäche zu verenden drohten. Somit muss also 0,005 g Argochrom pro. kg Körpergewicht als Dosis letalis angesehen werden. Die Sektion sämtlicher infolge Injektion durch Argochrom verendeter und getöteter Versuchstiere war in allen Händen dieselbe, nämlich: weiche, brüchige Konsistenz des Herzmuskels, der Leber und der Nieren, also: Myokarditis, Hepatitis und Nephritis mit vermehrter Flüssigkeitsbildung der serösen Häute wie Herzbeutel, Brustfell und. Bauchfell.

B. Heilversuche.

Die therapeutischen Versuche stellte ich bei solchen Infektionskrankheiten an, die in der Praxis besonders häufig vorkommen, und zwar in 7 Fällen von Druse. (Streptokokken Infektion), 2 Fällen von bösartigem Katarrhalfieber, 2 Fällen von jauchiger Metritis, 3 Fällen von katarrhalischer Pneumonie, 2 Fällen von Brustseuche und 4 Fällen von Rotlauf. Bei allen diesen Fällen verordnete ich außer Argochrom stets noch die sonst gebräuchlichen Mittel. Argochrom injizierte ich jeden 2. Tag, und zwar 1-4 mal, je nach Dauer der Krankheit. Als therapeutische Dosis sah ich 0,002 g pro kg Körpergewicht als hoch genug. Denn wenn auch bei den Versuchstieren 0,0038 g pro kg Körpergewicht gut vertragen wurden, so rechnete ich doch mit der Möglichkeit, dass bei einem durch infektiöse, fieberhafte Krankheit geschwächten Tiere die Giftwirkung des Mittels schon bei kleineren Dosen einsetzen konnte.

Von den 7 Drusefällen war der Verlauf der Krankheit in 6 Fällen der gleiche:

Trotz Argochrom-Injektion, Injektion jeden zweiten Tag war das Abszedieren der Kehlgangslymphknoten in keinem Falle zu verhindern, Am 5.—7, Tage mussten jedes mal die Abszesse gespalten werden, wonach sich reichlich Druseeiter entleerte.. Darauf trat jedes mal baldige Heilung ein. Dagegen konnte in einem Falle trotz Argochrombehandlung nicht verhindert werden, dass sich außer den Abszessen im Kehlgang auch noch einer in der Brusthöhle bildete, der am 9. Behandlungstage den Tod des Pferdes herbeiführte: In 2 Fällen von bösartigem Katarrhalfieber war die Argochrombehandlung ebenfalls gänzlich erfolglos; Die eine Kuh wurde 3 mal behandelt, musste aber am 8. Tage wegen völliger Aussichtslosigkeit geschlachtet werden. Die 2. Kuh musste schon 2 Stunden nach der ersten Injektion geschlachtet werden, da sie unruhig wurde, sich häufig niederwarf, stoßweise atmete und das Sensorium sich benommen zeigte. Ich hielt diese Erscheinungen schon für eine Vergiftung durch Argochrom trotz der geringen Dosis.

Ferner hatte ich Gelegenheit, das Mittel in 2 Fällen von jauchiger Metritis anzuwenden, und zwar bei einer Kuh infolge retentio secundinarum und bei einer Stute nach einer Schwergeburt. Außer Argochrom wurden noch desinfizierende und adstringierende Uterusspülungen und innerlich Herzmittel verabfolgt. Bei der Kuh trat trotz zweimaliger Argochrominjektion am 3. Tage der Tod ein. Bei der Stute konnte trotz häufiger Argochrombehandlung nicht verhindert werden, dass die anfangs rein lokale Entzündung an einer Stelle der Gebärmutter noch nach 15. Tagen zur jauchigen Meitritis und dann zur allgemeinen tödlichen Sepsis ausartete.

Bei Lungenentzündung wurde das Mittel in 5 Fällen verwendet, und zwar in 3 Fällen von katarrhalischer Pneumonie und 2 Fällen von Brustseuche. Alle 5 Fälle waren nicht besonders schwerer Natur und gelangten in 6—9 Tagen zur Heilung, jedoch bin ich überzeugt, dass sie auch ohne Argochrom ebenso schnell geheilt wären.

Bei Rotlauf der Schweine wurde das Mittel in 4 Fällen verwendet, trotzdem trat im allen 4 Fällen schon nach 24.Std. der Tod ein, obgleich außer Argochrom auch noch reichlich Rotlauf-Serum verimpft würde.

Schlußfolgerung!

Auf Grund meiner Versuche komme ich zu dem Schluß, dass dem Argochrom in der Veterinärmedizin entgegen den Berichten in der Humanmedizin und denen der beiden erwähnten Tierärzte keine besondere Heilwirkung beigemessen werden kann. Ich halte die therapeutische Dosis für viel zu schwach, als dass durch die geringe Menge von 0,002 oder höchstens 0,003 g pro kg Körpergewicht die Bakterien verschiedenster Art im Tierkörper abgetötet werden könnten. Stärkere Dosen sind aber wegen der heftigen Giftwirkung ausgeschlossen. Ich kann daher das Argochrom als Therapeutikum bei den oben erwähnten Krankheiten nicht empfehlen.

Es gibt nur extrem wenige Fälle in der wissenschaftlichen Literatur, die über allergische Reaktionen auf Methylenblau berichten. Zum Vergleich: 2% -17% der Bevölkerung sind gegen Penicillin allergisch.2 3 Wobei man sich streitet, ob es nun allergische Reaktionen oder Nebenwirkungen sind, die vermischt werden.

Schauen wir uns daher berichtete Fälle über allergische Reaktionen auf Methylenblau näher an.

“Nach unserem Kenntnisstand wurden jedoch nur zwei lebensbedrohliche Ereignisse mit intradermalem Methylenblau-Farbstoff gemeldet, und keines davon betraf Kinder. Wir berichten über den Fall eines 6-jährigen weißen Mädchens mit einem spitzoiden Melanom am rechten Unterarm. Sie wurde unter Vollnarkose einer Lymphszintigraphie unterzogen und intubiert in den Operationssaal gebracht. Intradermal wurde Methylenblau (0,2 ml) um die Läsion herum injiziert, und nach 5 Minuten wurde eine breite komplexe Bradykardie festgestellt, die innerhalb von weniger als 1 Minute zu einer Asystolie führte. Es wurde mit der kardiopulmonalen Reanimation begonnen. Es wurden mehrere Dosen Reanimationsmedikamente verabreicht und zweimal eine elektrische Kardioversion durchgeführt. Sie erholte sich vollständig und wurde auf die Intensivstation verlegt.”4

Zwei bekannte Fälle, es wird über einen dritten Fall berichtet. Alle drei Fälle betreffen eine Injektion in die Haut, sind also nicht direkt mit dem Trinken oder Schlucken des Mittels vergleichbar. 200 µl ist jedoch deutlich weniger, als man sich unter Umständen in den Kaffee tropft.

Ist in dieser Publikation kausal belegt, dass das Kind Antikörper gegen Methylenblau entwickelt hat und es sich wirklich um eine Allergie handelt?

“Sie wurde an einen Allergologen/Immunologen überwiesen, und es wurde ein Hautpricktest für Anästhetika durchgeführt. Die Ergebnisse waren negativ. Der Allergologe vermutete, dass Methylenblau die Ursache sei. Allerdings können andere Medikamente, darunter Fentanyl, Propofol und Cefuroxim, nicht ausgeschlossen werden. Der Allergologe empfahl eine Vorbehandlung mit Diphenhydramin, Prednison und Albuterol-Inhalation. Zwei Wochen später wurde der Eingriff unter Befolgung der Empfehlungen und ohne Verwendung von Methylenblau-Farbstoff oder Antibiotika sicher durchgeführt.”

Das Kind hat also einen Medikamentencocktail bekommen und darauf ungünstig reagiert.

Wir stehen also vor dem gleichen Problem wie bei Penicillin: Allergie oder Nebenwirkung? Zudem? War es vielleicht die Mischung?

Gehen wir einmal zurück in die Geschichte:

Methylenblau verstärkt die Wirkung von Lokalanästhetika. Das weiß man schon seit 1952.

Österreichische Apotheker-Zeitung, Juli-Dezember 1952, S. 6305

“Das Methylenblau verstärkt die Wirkung der Lokalanästhetika, leider aber auch ihre Toxizität. Ebenso vergrößert es die Wirkung des Azetylcholins und des Schlangengiftes. (Trov. Soc. pharm. Montpell. 49, 2.)”

Könnte es sein, dass es die Mischung zwischen Anästhetikum und Methylenblau war und somit das Anästhetikum das Problem war?

Schauen wir uns die weiteren Fälle aus der Literatur an:

“Brustoperation sowie zur Sentinel-Lymphknoten-Biopsie überwiesen. ^99mTc-Antimonsulfid-Kolloid wurde am Tag vor der Operation oberflächlich injiziert, um während der Operation eine Sentinel-Lymphknoten-Kartierung mit einer Gamma-Sonde durchzuführen. Nach Einleitung der Anästhesie wurden 2 ml Methylenblau subdermal in den Bereich um den Brustwarzenhof des Indexquadranten der Brust injiziert. Zwei Minuten nach der Injektion des blauen Farbstoffs entwickelte die Patientin eine schwere Hypotonie, Tachykardie, Bronchospasmus sowie Hypoxie.“6

Leider keine Nennung des Anästhetikums und keine Analyse, ob wirklich eine Allergie vorlag.

Der dritte Fall, gleiches Spiel:

“Eine 62-jährige Frau, die sich einer Sentinel-Lymphknoten-Biopsie und einer Lumpektomie rechts unterzog, erhielt neben Anästhetika auch Methylenblau.”7

Erneut: keine Nennung des Anästhetikums nd keine Analyse, ob wirklich eine Allergie vorlag.

Dieser französische Fall jedoch sieht anders aus:

“Wir berichten über eine dokumentierte schwere Immunglobulin-E-vermittelte Überempfindlichkeitsreaktion im Zusammenhang mit der Verwendung von 1% Methylenblau zum Nachweis der Durchgängigkeit der Eileiter während einer Vollnarkose. Klinische Symptome, Ergebnisse biologischer Untersuchungen und positive Hauttests bestätigten eine anaphylaktische Reaktion auf Methylenblau.

[…]

Nach einer Stunde ereignisloser Anästhesie (Midazolam, Sufentanil, Propofol, Atracurium) und Operation wurde eine intrauterine Instillation von 1 % Methylenblau (Renaudin, Itxassou, Frankreich) verabreicht, um die Durchgängigkeit der Eileiter zu überprüfen. Innerhalb von 2 Minuten nach der Instillation von Methylenblau wurde ein deutlicher Abfall des SpO2 unter 80 % und der endtidalen Kohlendioxidkonzentration (18 mmHg) beobachtet, während ein Abfall des arteriellen Blutdrucks (60/26 mmHg) in Verbindung mit einer Tachykardie (140 Schläge pro Minute) auftrat. […] Der Plasma-Histaminspiegel (RIA, Immunotech Luminy, Frankreich), der zur Bestätigung des Beginns der Histaminfreisetzung gemessen wurde, war deutlich auf 700 nmol erhöht. L-1 (N < 10 nmol. L-1). […] Der Pricktest mit Methylenblau war positiv, während Hauttests mit Latex und allen anderen Medikamenten negativ blieben. Um die Verantwortung von Methylenblau zu bestätigen, wurde ein In-vitro-Leukozyten-Histaminfreisetzungstest mit Methylenblau durchgeführt, der positiv ausfiel (Abbildung), während er in 2 Kontrollseren negativ blieb.”8

Dieser Fall belegt eindeutig eine Allergie gegen Methylenblau.

Die Lösung, wenn man sich Sorgen macht, man könnte allergisch gegen Methylenblau sein, wird jedoch direkt mitgeliefert: der Pricktest:

Bild Doccheck Pricktest: https://www.doccheck.com/de/detail/photos/42036-pricktest

Wenn man ganz sicher gehen will, bevor man MB verwendet, dass man nicht allergisch ist: Tropfen auf die Haut und anpiecksen. Wird es knubbelig und dick, ist man allergisch.

Dass nach 150 Jahren nun ein erster Fall mit einer MB-Allergie belegt ist und es potentiell 3 weitere gibt zeigt, wie selten das Phänomen ist, aber es ist existent.

Des Weiteren sollten sich die Chirurgen vielleicht auch daran erinnern, dass man seit 1952 weiß, dass Methylenblau die Wirkung von Lokalanästhetika verstärkt und das auch bei anderen Anästhetika der Fall sein könnte.

Schlimm scheint der Effekt nicht zu sein, weil man Anästhetika einige Jahre zur Sicherheit, dass man sie nicht vertauscht, mit Methylenblau gefärbt hat, bis jemandem 10 Jahre später aufgefallen ist, dass eine nicht so intelligente Idee war.9

Es gibt einen Übersichtsartikel zu dem Thema10, der einen anderen Farbstoff namens Patent Blue V mit dazu nehmen musste, für den es deutlich mehr Fälle von allergischen Reaktionen gibt als bei Methylenblau.

“Methylenblau wurde aufgrund seiner vergleichbaren Wirksamkeit bei der SLN-Identifizierung, seiner geringeren Kosten und seiner geringeren allergischen Reizung als mögliche Alternative zu Patentblau V vorgeschlagen.”11

“Dennoch wurde die Injektion von Methylenblau für die SLNB mit Hautreaktionen wie oberflächlichen Ulzerationen oder Erythemen an der Injektionsstelle und Hautnekrosen bei intradermaler Injektion sowie mit schweren Kapselkontrakturen um das Implantat herum in Verbindung gebracht.”12

Auch diese Erkenntnis mit den Hautreaktionen ist nicht neu, seit über 100 Jahren bekannt und wurde schon bei Argochominjektionen beschrieben.13

Ein weiteres Review kommt somit zu folgendem Schluss:

“Eine systematische Überprüfung der anaphylaktischen Reaktionen auf blaue Farbstoffe während der Sentinel-Lymphknoten-Kartierung durch Bezu et al.14 ergab eine Rate allergischer Reaktionen auf Patentblau V und Isosulfanblau von 0,07 bis 2,7 %, während bei der Sentinel-Lymphknoten-Kartierung keine allergischen Reaktionen auf Methylenblau auftraten. Der Autor kam zu dem Schluss, dass Methylenblau sicherer zu sein scheint, obwohl Hautnekrosen als nicht-allergische Reaktion auf Methylenblau berichtet wurden. Eine weitere Untersuchung von Ramin et al.15 ergab, dass Methylenblau unter den blauen Farbstoffen das höchste Sicherheitsniveau aufweist, wenn man seine häufige Verwendung in der medizinischen Praxis berücksichtigt.”16

Fazit:

Ja, es gibt einen einzigen sicher bestätigten Fall in der wissenschaftlichen Literatur mit einer belegten allergischen Reaktion auf Methylenblau. Bei den anderen Fällen ist nicht klar, ob es die Kombination mit den Anästhetika war.

(Danke an Geoff Pain, der mich auch das Thema aufmerksam gemacht hat).

Von der Plazentaschranke und dass viele Stoffe diese nicht überschreiten können, wusste man damals nichts.

Versuche an Schwangere gelten heutzutage eigentlich als unethisch, sind aber für die modRNA-Produkte in ähnlicher Art durchgeführt worden, wie diese Versuche mit Methylenblau.1 2 Anders als damals hat man es aber bei den modRNA-Produkten vermieden das Kind zu untersuchen und hat sich auf Placenta und Nabelschnur beschränkt. So genau wollte man es heutzutage wohl lieber nicht wissen.

Methylenblau überschreitet die Plazentaschranke und es wird vom Kind selbst auch verstoffwechselt.

Das Hauptproblem aus meiner Sicht ist, dass Methylenblau auf die Blut-Hirn-Schranke überschreitet und nicht abschätzbar ist, wie es sich auf ein sich noch entwickelndes Gehirn auswirkt. Dazu sind mit nicht einmal Tierstudien bekannt. Das würde ich ungern am eigenen Nachwuchs erforschen, wenn ich ehrlich bin. Daher würde ich sagen, dass MB in der Schwangerschaft kontraindiziert ist, bis man eine saubere Datenlage hat.

Um diese Daten englischsprachigen Wissenschaftlern wieder zugänglich zu machen, habe ich den Text digitalisiert und von Hand um zwei Rechtsschreibreformen in die aktuell übliche deutsche Rechtschreibung korrigiert. Anmerkungen habe ich wie folgt markiert (*Anmerkung*).

Google Translate Link: Methylene blue during pregnancy

Das Original kann hier heruntergeladen werden:

‘Krohne, Otto: Beitrag zur Lehre vom Stoffaustausch zwischen Mutter und Frucht’, Bild 1 von 48 | MDZ https://www.digitale-sammlungen.de/de/view/bsb11597294?q=%28Otto+Krohne+-+Lehre+vom+Stoffaustausch+zwischen+Mutter+und+Frucht%29&page=,1

“Der Stoffwechsel des Fötus und Neugeborenen, ein noch zum größten Teil dunkles und unerforschtes Gebiet der Geburtshilfe, hat im letzten Jahrzehnte das Interesse der Geburtshelfer und Physiologen in erhöhtem Masse in Anspruch genommen.

Seitdem Gusserow seine bekannten Versuche mit benzoesaurem Natron an Schwangeren und Kreissenden veröffentlicht hat, ist über den Übergang von Stoffen aus dem mütterlichen Blut im das fötale viel experimentiert worden. Es ist gelungen, nicht nur den Übergang von gasförmigen und flüssigen, sondern auch — was besonders wichtig erschien — denjenigen von geformten Elementen auf den Fötus mit Sicherheit nachzuweisen. — Ferner stellten, was die Ausscheidung dieser von der Mutter überkommenen Stoffe durch den Urin des Neugeborenen anbelangt, Porak, Fehling und Benicke, die mit Jodkali (*Jod-Kaliumiodid-Lösung*), Ferrocyankalium (*Kaliumhexacyanoferrat II, E 536*) und Salicylsäure an Kreissenden (*Gebärenden*) experimentierten ziemlich übereinstimmend fest, dass die chemischen Reaktionen auf diese Stoffe im zweiten und dritten Urin von Neugeborenen stets positiver und stärker ausfielen, als im ersten unmittelbar post partum (*Wochenbett, nach der Geburt*) mit Katheder entnommenen Urin, und zwar auch dann, wenn die betreffenden Schwangeren und Kreissenden das Mittel schon längere Zeit vor der Geburt gebraucht hatten.

Sie schlossen daraus, dass die Nierensekretion der Frucht erst im extrauterinen Leben allmählich in Gang käme. —

Dem entgegen hat noch in neuester Zeit (Gynäkologen - Congress 1888) Dührssen die Tatsache als solche auf Grund seiner Beobachtungen über die Ausscheidung der Hippursäure entschieden bestritten. Er hat gefunden dass längstens nach 20 Stunden die Hippursäure vollständig aus dem kindlichen Urin verschwunden ist und hat auch in 3 Fällen, allerdings nur je einmal bei drei verschiedenen Kindern, die Menge der ausgeschiedenen Hippursäure quantitativ bestimmt.

Es liegt auf der Hand, dass zur endgültigen und sicheren Entscheidung der Frage, ob tatsächlich beim Neugeborenen in den späteren Urinen eine erheblich größere Menge der ihm schon intrauterin einverleibten Stoffe ausgeschieden wird, wie in dem ersten unmittelbar post partum entleerten Urin, weder die zwar zahlreichen, aber doch immerhin nur qualitativ chemischen Reaktionen der zuerst genannten Autoren, noch die äußerst spärlichen quantitativen Bestimmungen Dührssens genügen. Denn die größere oder geringere Intensität rein qualitativer Reaktionen, die vielfach von zufälligen Faktoren abhängig ist, gestattet natürlich ebenso wenig einen sicheren Schluss auf die Quantität des nachzuweisenden Stoffes, wie eine nur einmalige quantitative Analyse ein Urteil über Zu- und Abnahme der mit den einzelnen Urinen ausgeschiedenen Menge. — Nur eine ganze Reihe quantitativer Bestimmungen derjenigen Mengen, die in jedem einzelnen Urin von der Geburt bis zur beendigten Ausscheidung enthalten sind, kann zu einem sicheren Resultate führen.

Aber derartige quantitative Analysen auf dem gewöhnlichen Wege der Gewichtsbestimmung oder des Titrierens haben bei den minimalen Mengen die im Urin des Neugeborenen zur Ausscheidung gelangen, ihre großen Schwierigkeiten. Sie sind in jedem Falle sehr zeitraubend, oft aber direkt unmöglich. Auf der anderen Seite schien eine Nachprüfung der von Porak, Fehling und Benicke aufgestellten Behauptung aber doch von einigem Wert.

Denn, wenn auch die weitgehenden Folgerungen, die sie hinsichtlich der fetalen Nierensekretion daran geknüpft haben, schon von Krukenberg widerlegt sind, würde immerhin die nach der (Geburt eintretende Steigerung der Ausscheidung fremder Stoffe eine interessante Parallele zu den Stoffwechselvorgingen der ersten Lebenstage überhaupt bilden, sie würde auch manche Vermutung, die in dieser Hinsicht aufgestellt ist, zu beweisen im Stande sein.

Ich habe deshalb Versuche mit einem Farbstoffe - dem Methylenblau - angestellt, das, mit dem Urin des Kindes wieder ausgeschieden, wegen seiner intensiven Farbekraft und seiner Farbenbeständigkeit sich leicht quantitativ auf kolorimetrischem Wege bestimmen lasst.

Diese Methode gibt recht genaue Resultate, auch bei minimalen Mengen, und ist doch verhältnismäßig einfach und ohne viel Zeitverlust auszuführen. Noch eine andere Eigenschaft des Methylenblau schien für derartige Untersuchungen günstig: das Methylenblau geht nicht, wie das Jodkali und die Salicylsäure in die Milch über. — Die Ausscheidung im Urin des Neugeborenen kann also nicht von der etwa mit der Nahrung aufgenommenen Milch herrühren. Ich. habe mich davon überzeugt, indem ich Wöchnerinnen Methylenblau gab. Der Urin der Kinder, die sie stillten, zeigte niemals Blaufärbung, während andererseits Urin vom Neugeborenen, deren Mutter als Schwangere Methylenblan bekommen hatten, stets mehr oder minder gefärbt erschien, auch wenn die Kinder mit Kuhmilch künstlich genährt wurden. Auch ist die Methylenblau-Ausscheidung am dritten, spätestens am vierten Tage beendigt, zu einer Zeit also, wo ein bedeutendes Quantum an Milch noch nicht konsumiert wird.

Ich habe im Verlauf von vier Monaten an 42 Schwangeren und Kreissenden Versuche mit Methylenblau angestellt. Dieses Medikament, von Ehrlich und Guttmann vor drei Jahren als Antineuralgikum und Spezifikum gegen Malaria empfohlen, ist durchaus ungiftig, auch in größeren Dosen. Die große Zahl der von mir angestellten Versuche ist wohl der beste Beweis hierfür (*Ein altbekanntes Argument in der Medizin, welches auch Pfizer gerne in Prozessen nutzt*). Nur in einem einzigen Falle und auch hier nur vorübergehend, trat bei einer Schwangeren heftiges Erbrechen auf. Reizerscheinungen von Seiten der Blase, wie sie Ehrlich erwähnt, habe ich nie beobachten können.

Das Methylenblau wurde in Gelatinekapseln à 0,1 bis zu 0,6 pro dosi und 1,0 pro die gegeben. Mit der Hohe der Dosis und der Dauer des Gebrauchs wurde mannigfach variiert. Das Mittel wurde bis zu 2 Monaten vor der Geburt gebraucht. Der Übergang des Methylenblau in den mütterlichen und auch in den fötalen Kreislauf erfolgt verhältnismäßig rasch. Bei der Mutter trat die erste Färbung des Urins in der Regel eine halbe bis eine Stunde nach dem Gebrauch auf, beim Neugeborenen enthielt der Urin schon Spuren von Methylenblau, wenn das Mittel nur etwa anderthalb Stunden ante partum der Mutter gereicht war. Um zu sehen, innerhalb welcher Zeit bei Mutter und Kind die Ausscheidung des Methylenblau beendet sein würde, wurde mit der Darreichung des Methylenblau kürzere oder längere Zeit vor der Geburt ausgesetzt. Bei der Mutter verschwand die Färbung des Urins etwa zwei bis vier Tage nach der letzten Medikation; im fötalen Kreislauf schien das Methylenblau länger zurückgehalten zu werden. Wenigstens fanden sich in einem Fall (Lenz), wo die Geburt des Kindes acht Tage nach dem Aussetzen des Methylenblau - Gebrauches stattfand, noch Spuren Methylen im Urin des Neugeborenen, während bei der Mutter die Ausscheidung schon vier Tage früher beendet war. Wurde mit der Darreichung des Methylenblau länger als acht Tage ante partum ausgesetzt, so war In keinem Falle mehr Methylen im Urin des Kindes nachzuweisen, auch wenn die Mutter schon Monate lang vorher größere Dosen erhalten hatte. Der quantitative Nachweis des Methylens im Urin der Neugeborenen wurde in der Weise vorgenommen, dass der Farbstoff aus dem Urin durch wiederholtes Ausschütteln mit Chloroform ausgezogen wurde, um so die Eigenfarbe des Urins als Fehlerquelle bei der kolorimetrischen Bestimmung auszuschalten. Das Chloroform wurde dann im Scheidetrichter von dem nun farblosen Urin gesondert. Bei sehr geringem Gehalt des Urins an Methylenblau wurde der Chloroformauszug vorsichtig eingedampft. Die erhaltene Lösung des Farbstoffes in Chloroform wurde in ein Reagenzglas gegeben, ein zweites Reagenzglas von gleicher Weite und gleichem Lichtbrechungsvermögen wurde mit einer konzentrierten Normallösung gefüllt und solange in messbarer Weise verdünnt, bis beide dem Augenschein gleich gefärbt waren. — Es gelang so, Methylenblau bis zu 0,000001 mit annähernder Sicherheit quantitativ zu bestimmen. In vielen Fällen, namentlich auch bei den Untersuchungen des Fruchtwassers, war in den zu untersuchenden Flüssigkeiten nicht die geringste Spur von Farbe sichtbar, während der eingedampfte Chloroformauszug nicht unbedeutende Mengen von Methylenblau ergab. —

Da das Methylenblau in dem Urin auch in reduzierter Form = als sogenanntes Leukoprodukt erscheinen kann, wurde dieses vor dem Ausschütteln den zu untersuchenden Flüssigkeiten durch Zusatz von Eisenchlorid und Erwärmen wieder zum nachweisbaren Farbstoff oxydiert. Das Leukoprodukt oxydiert sich übrigens auch durch den Sauerstoff der Luft ziemlich schnell und es ist deshalb eigentlich nur nötig, den Urin tüchtig umzuschütteln und längere Zeit vor der Untersuchung stehen zu lassen.

Die einzelnen Urine wechseln beim Methylenblau- Gebrauch oft außerordentlich in ihrer Färbung. Sie durchlaufen unter Umständen die ganze Karbenskala von dunkelblau bis hellgrün. Es rührt dies wohl daher, dass die Farbe des Urins ja noch abhängig ist von seiner Konzentration und von der zu verschiedenen Zielten wechselnden Eigenfarbe des Urins, vielleicht auch von dem größeren oder geringeren Gehalt an Leukoprodukt. Für die kolorimetrische Bestimmung wie ich sie geübt, ist dies ohne Einfluss, da ja einmal Konzentration und Eigenfarbe des Urins durch das Ausschütteln mit Chloroform und andrerseits der Gehalt an Leukoprodukt durch die Oxydation mit Eisenchlorid als Fehlerquellen ausgeschaltet werden können. Ob die Farbe des Urins von der Hohe der gegebenen Methylenblau-Dosis abhängig ist, war für meine Untersuchungen ebenfalls gleichgültig, denn es lag mir nur daran, diejenigen Mengen genau zu bestimmen, die im Urin wirklich zur Ausscheidung gelangen. —

Ich musste auf diese Verhältnisse näher eingehen, wie eigentlich notwendig, da zur Zeit in der Deutschen medizinischen Wochenschritt zwischen Alexander (Breslau) und Kutner (Berlin) eine etwas erregte Diskussion über die Ausscheidung des Methylenblaus im Urin und über die wichtige Frage, ob derselbe blau oder grün aussieht, geführt wird.

Ich komme jetzt zu den Ergebnissen meiner quantitativen Methylenblau- Analysen im Urin der Neugeborenen.

War das Methylenblau in kleiner Dosis und erst kurze Zeit vor der Geburt gegeben, so war der erste unmittelbar post partum entleerte Urin frei von Methylenblau, die Ausscheidung begann erst mit dem zweiten Urin. Dasselbe war der Fall, wenn längere Zeit ante partum mit dem Methylenblaugebrauch ausgesetzt war, und infolgedessen überhaupt nur geringe Mengen zur Ausscheidung gelangten. Dieselben ließen sich ebenfalls erst im zweiten Urin nachweisen. War dagegen längere Zeit Methylenblau gebraucht, so enthielt schon der allererste Urin, der mit dem Katheter entnommen wurde, Methylenblau und zwar um so mehr, je längere Zeit das Methylenblau vorher gebraucht war.

In sechs Fallen habe ich den Methylenblaugehalt dieses ersten unmittelbar post partum entleerten Urins feststellen können.

Je längere Zeit hindurch also Methylenblau der Mutter gegeben wird, desto größer ist der Gehalt des ersten Urins an Methylenblau.

Diese Tatsache lässt eine intrauterine Funktion der fötalen Niere wahrscheinlich erscheinen. Einen Beweis dafür kann sie nicht bilden, weil es ja in keinem Falle ausgeschlossen erscheint, dass der gleich post partum entleerte Urin erst nach Eintritt der Geburtswehen sezerniert wurde, und weil natürlich der erste sezernierte Urin um so mehr Methylenblau enthalten muss, je mehr im kindlichen Organismus aufgespeichert ist. Das wird aber bei längerer Darreichung eher der Fall sein, als bei nur kurzer Dauer des Gebrauchs.

Außerdem kommt für den größeren oder geringeren Gehalt des ersten post partum entleerten Urins auch die Größe der der Mutter gegebenen Dosis und die die individuell vielleicht verschiedene Dauer und Stärke der Ausscheidung in Betracht.

Nach den oben angeführten sechs Fällen scheint es ja allerdings, als ob weniger die Hohe der Dosis, als die längere Dauer des Gebrauchs von Einfluss wäre.

Was die Ausscheidung des Methylenblau in den späteren Urinen des Neugeborenen am zweiten und dritten Tage anbelangt, so bestätigt sich ausnahmslos auf Grund der quantitativen Analysen, von denen ich nur einige an dieser Stelle anführe, die von Porak, Fehling und Benicke aufgestellte Behauptung, dass die Ausscheidung in den späteren Urinen eine bei weitem stärkere sei, als in dem ersten unmittelbar post partum entleerten Urin.

In allen Fällen - ich habe bei 20 Kindern die quantitativen Analysen durchgeführt - zeigt es sich dass ungefähr bis zum dritten Tage sowohl die Gesamtmenge des innerhalb 24 Stunden ausgeschiedenen Methylens, als auch der Gehalt der einzelnen Urine an Methylenblau steigt, um dann rasch abzufallen. Die Methylenblau-Ausscheidung steigt also prozentual und absolut!!

War die Menge des dem Fötus von der Mutter überkommenden Methylens überhaupt gering, so fiel die Acme der Ausscheidung natürlich, da dieselbe auch früher aufhörte, auch auf einen früheren Tag, beispielsweise zweiten oder ersten Tag.

Saalmüller: entbunden am 12. III, Mittags 12 Uhr, (3 Stunden a. partum 0.2 gr M.)

Hieraus erklärt sich wohl auch die Dührssen’sche Beobachtung, dass die Ausscheidung der Hippursäure schon nach sehr kurzer Zeit beendigt sei. — Es ist jedenfalls in seinen Fallen überhaupt wenig Hippursaure zur Ausscheidung gekommen und deshalb meist noch im Lauf des ersten Tages die Acme der Ausscheidung erreicht.

Es ist somit die von Porak, Fehling und Benicke festgestellte Tatsache der mit den ersten Lebenstagen stetig sich steigernden Ausscheidung fremder Stoffe durch die Nieren des Neugeborenen gegenüber der gegenteiligen Behauptung Dührssen’s als bewiesen zu erachten.

Was die aus dieser Tatsache gezogenen Schlussfolgerungen anbelangt, so nahmen Porak und Felling bekanntlich an, dass die Nierensekretion der Frucht erst extrauterin in Gang käme und folgerten weiterhin sogar, dass eine intrauterine Funktion der Niere nicht bestünde. Doch schon Benicke und nach ihm namentlich Krukenberg haben darauf hingewiesen, dass die er höhte Ausscheidung durch den in den ersten Lebenstagen erhöhten Stoffwechsel bedingt sei.

Es empfahl sich also, wollte man überhaupt dieser Frage näher treten, neben den quantitativen Methylenblau-Analysen auch den sonstigen Eigenschaften des kindlichen Urins in den ersten Lebenstagen, namentlich aber auch seinem Harnstoffgehalt als dem besten Gradmesser für die im Organismus sich abspielenden Stoffwechselvorginge Aufmerksamkeit zu schenken. Ich habe daher von Anfang an die Mengen, das spezifische Gewicht und den Harnstoffgehalt des kindlichen Urins festgestellt.

[…]

(*die Ausführungen zu den Harnstoffmessungen habe ich nicht bearbeitet, die sind für Methylenblau nicht von Interesse*)

[…]

Wir erinnern uns nun, dass die Menge des Urins beim Neugeborenen wächst, und dass trotzdem bis zum dritten Tage der Prozentgehalt der einzelnen Urine an Methylenblau, wie an Harnstoff zunimmt. Es müssen sich hier also ebenfalls erhöhte Zersetzungsvorgänge abspielen. Da nun das Methylenblau beim Neugeborenen mit der Nahrung nicht mehr zugeführt wird, sondern sich nur noch aus der Zeit seines intrauterinen Daseins im Körper befindet, kann seine prozentual gesteigerte Ausscheidung natürlich nur der Ausdruck eines erhöhten Zerfalles von Körpereiweiß sein. Durch eine Zersetzung des Nahrungseiweißes wird ja seine Ausscheidung nicht berührt und die erhöhte Flüssigkeitsaufnahme konnte nur die absolute Menge vermehren, nicht aber den Gehalt der einzelnen Urine an Methylenblau.

Für diese Ausscheidung des Methylenblaus, die proportional dem Zerfall von Körpereiweiß erfolgt, gibt es in der Physiologie der Nierensekretion schon eine Analogie in der Ausscheidung des Kochsalzes im Hungerzustande. Das Kochsalz kann hier natürlich auch nur aus dem Zerfall von Körpersubstanz frei werden.

Bei Fick heißt es hierüber: “Die Kochsalzausscheidung ist wahrscheinlich, zum Teil wenigstens, an die Zersetzung der Eiweißkörper geknüpft, mit denen Kochsalz und andere Salze der Säfte und Gewebe in einer Art von chemischer Verbindung sich zu befinden scheinen. Man kann sich hiernach vorstellen, dass bei der Zersetzung jedes Eiweißmoleküls ein damit verbundenes Salzteilchen frei und ausscheidbar wird.“

Denselben Vorgang darf man sich wohl auch für die Ausscheidung des Methylenblaus, das sich schon vor der Geburt im neugeborenen Organismus befand, vorstellen.

Von Krukenberg wird des Weiteren als Ursache der m den ersten Lebenstagen erhöhten Harnstoffausscheidung die im Verhältnis zum intrauterinen Leben beim Neugeborenen gesteigerte Muskelarbeit angegeben. Das ist aber wohl nicht richtig! Denn bei der Muskeltätigkeit werden bekanntlich nur stickstofffreie Verbindungen verbrannt, und der Harnstoff repräsentiert doch nur das Endprodukt der Verbrennung stickstoffhaltiger Substanzen.

Allgemein anerkannt ist dagegen als Ursache einer erhöhten Harnstoffausscheidung eine gesteigerte Wärmeproduktion, deren Bedeutung, wie schon erwähnt, von Hofmeier und Krukenberg ganz besonders hervorgehoben wird.

(*Die Ausführungen über die Temperaturschwankungen in den ersten Lebenstagen und über den Stickstoffgehalt des Urins in Abhängigkeit der Temperatur und die Bestimmung des Fettgehalts der Milch, habe ich, weil sie irrelevant für Methylenblau sind, nicht digitalisiert*)

Versuche über den Übergang von Methylenblau in das Fruchtwasser

Seit Gusserows bekannten Versuchen ist man vielfach bestrebt gewesen, über die Frage nach der Herkunft des Fruchtwassers, die man früther durch die chemische Analyse desselben zu lösen hoffte, dadurch Aufschluss zu erlangen, dass man experimentell den Übergang von löslichen Stoffen in dasselbe untersuchte.

Aus der zahllosen Reihe von Experimenten, die im Laufe der Jahre angestellt wurden, sind nur zwei positiv ausgefallen: die von Gusserow mit benzoe-saurem Natron am Menschen und die von Zuntz mit Indigocarmin am Kaninchen. Gegen beide sind auch von verschiedenen Seiten gewichtige und niemals ganz widerlegte Einwände erhoben worden. Doch sind die Versuche selbst, die Folgerungen, die daraus gezogen wurden und die Einwände, die dagegen erhoben wurden, zu sehr bekannt, als dass ich näher darauf eingehen brauchte.

Die Ergebnisse der anderen Autoren, die über den Übergang löslicher Substanzen in das Fruchtwasser experimentierten, waren anfangs sich durchaus widersprechend, in einem Teil der Fälle wurden die Stoffe, mit denen experimentiert wurde, im Fruchtwasser nachgewiesen, in einem anderen Teile wurden sie nicht gefunden. Erst mit der Verbesserung der Untersuchungsmethoden gelang der Nachweis der betreffenden Stoffe im Fruchtwasser häufiger, und Krukenberg hat zuletzt eine Reihe von 10 Fällen veröffentlicht, in denen er ausnahmslos den Übergang von Jodkali in das Fruchtwasser nachgewiesen hat. Doch gestattete auch dieser konstante Nachweis von fremden, der Mutter einverleibten Stoffen immer noch keine Schlüsse hinsichtlich der Herkunft des Fruchtwassers zu ziehen, denn in jedem dieser Fälle war der betreffende Stoff auch im ersten Urin des Kindes nachweisbar.

Es konnte somit nicht entschieden werden, ob er auf dem Wege der Transsudation von der Mutter oder durch die Nieren vom Kind her ins Fruchtwasser gelangt sei.

Man hätte also einen Stoff finden müssen, der nur auf dem einen oder dem anderen dieser beiden möglichen Wege in das Fruchtwasser gelangt sein konnte.

Eine Eigenschaft des Methylenblaus musste hier zu Versuchen auffordern:

Das Fruchtwasser hat bekanntlich in seiner Zusammensetzung die größte Ähnlichkeit mit einem serösen Transsudat. Durch die Untersuchungen von Kowalsky ist, nur für Tiere, festgestellt, dass das Methylenblau, obwohl es sich in allen Organen des Körpers nachweisen lässt und mit Harn und Kot ausgeschieden wird, niemals in seröse Transsudate, wie z. B. präkardiales, pleuritisches Exsudat, Ascites, übergeht.

Ging nun auch beim Menschen das Methylenblau nicht von der Mutter aus auf dem Wege der serösen Transsudation in das Fruchtwasser über, wahrend es sich doch stets im kindlichen Urin fand und mit demselben natürlich auch eventuell in das Fruchtwasser entleert werden musste, so schien es a priori nicht ausgeschlossen, dass man damit ein Mittel habe, um den Anteil, den die totale Nierensekretion an der Bildung des Fruchtwassers hat, abzumessen.

Ich habe bei den 42 Schwangeren und Kreissenden, denen ich Methylenblau gab und bei denen ich mit der Zeit der Darreichung sowohl, als mit der Hohe der Dosis mannigfach variierte, 19 Mal Fruchtwasser auffangen können. Die Blase wurde mit einem langen Troicart gesprengt, nachdem vorher die Scheide sorgfältig erst mit irgend einem Desinfiziens und dann mit gekochtem Wasser ausgespült war. — Um Verunreinigungen mit dem mütterlichen Urin zu vermeiden, wurde stets vorher katheterisiert und zum Überfluss die Harnröhrenmündung während der Sprengung der Blase noch mit einem Wattebausch zugehalten.

Siebenmal war das Fruchtwasser in größerem oder geringerem Grade mit Mekonium verunreinigt.

Unter den 12 Malen, wo ich es ganz rein auffangen konnte, fand ich zweimal Methylenblau in demselben:

I. Hubert: (hat innerhalb fünf Tagen vor vor Entbindung insgesamt 1,2 g Methylenblau erhalten)

Fruchtwasser, dessen Menge nicht zu bestimmen, enthält:

pro ml 0,000002 g Methylenblau

1. Urin 5 ml pro ml 0,0000026

II. Greubel: (innerhalb drei Wochen insgesamt 10,5 g Methylenblau) Fruchtwasser: pro ml 0,000002 g Methylenblau

1. Urin 9,1 ml pro ml 0,000007.

Es bleiben somit 10 Fälle, in denen ich mit Sicherheit nach der für die Untersuchung des Urins im ersten Teil angegebenen Methode das Nichtvorhandensein des Methylenblaus im Fruchtwasser konstatieren konnte, obgleich einzelne der Schwangeren das Mittel bis zu 5 Wochen vor der Geburt und keine unter vier Tagen vor derselben, in ziemlich großer Dosis erhalten hatten.

Bei zwei von diesen Fällen, wo ich kein Methylenblau im Fruchtwasser nachweisen konnte, war die kindliche Blase leer.

In vier von den 12 Fällen, wo ich kein Methylenblau im Fruchtwasser nachweisen konnte, hatte ich den Methylenblaugebrauch mit der Darreichung von Jodkali kombiniert.

In allen vier Fallen fand sich Jodkali im Fruchtwasser und kein Methylenblau. Bei den beiden Fällen, in denen ich Methylenblau fand, hatte ich kein Jodkali gegeben. Wollte ich aus diesen vier Fällen, wo ich Jodkali im Fruchtwasser fand, Methylenblau aber vermisste, wie überhaupt aus den 10 Fallen wo ich Methylen nicht nachweisen konnte, den Schluss ziehen, dass das Methylenblau nicht auf dem Wege der Transsudation in das Fruchtwasser überginge, so müsste ich weiter folgern, dass die beiden Male, wo ich Methylenblau fand, dasselbe aus dem kindlichen Urin dahin gekommen sei, dass also, wenn auch verhältnismäßig selten, eine intrauterine Harnentleerung des Fötus statthabe. Die beiden Fälle, in denen die Blase post partum leer war und sich doch kein Methylenblau im Fruchtwasser fand, müsste ich dann so erklären, dass die Urinentlehrung des Fötus erst mach dem Blasensprung in das nachfolgende Fruchtwasser erfolgt sei.

Den Methylenblaugehalt des Nachwassers habe ich niemals untersucht, da bei ihm eine Verunreinigung mit mütterlichem Urin sich doch niemals mit Sicherheit ausschließen lässt.

Diese Schlüsse würden manche Wahrscheinlichkeit für sich haben, sie würden auch mit der heute geltenden Ansicht, dass das Fruchtwasser zum großen Teil Transsudat von der Mutter und nur durch den Urin des Fötus häufiger verunreinigt werde, vollkommen in Einklang stehen.

Indessen diese Schlüsse waren bei der geringen Zahl von exakten Beobachtungen, die mir trotz meiner großen Versuchsreihe glückten, äußerst gewagt.

Wenn ich auch bei meinen Urinuntersuchungen feststellen konnte, dass der Nachweis des Methylenblaus durch wiederholtes Ausschütteln mit großen Mengen Chloroform und nachherigem Eindampfen bis auf 0,5-1 ml noch in ganz minimalen Mengen gelingt, so habe ich mich doch andererseits bei dem Nachweis von Jod, das bekanntlich zu den sehr leicht nachzuweisenden Stoffen gehört, überzeugt, wie heikel derartige Untersuchungen beim Fruchtwasser sind sind.

Ich habe, um mich von dem Wert, beziehungsweise Unwert, der von den verschiedenen Autoren angegebenen Methoden des Jodnachweises im Fruchtwasser zu überzeugen, das Fruchtwasser von einer Person, der ich 40 Minuten vor dem Blasensprung ein Gramm Kal. jodat. gegeben, auf drei Methoden untersucht.

Zunächst habe ich das Fruchtwasser mit Stärkelösung, der Salpetersäure zugesetzt war, versetzt; es zeigte sich keine Reaktion.

Dann habe ich 40 ml desselben Fruchtwassers unter Zusatz von Natriumnitrit und Schwefelsaure überdestilliert und das Destillat mit Stärke auf Jod untersucht. Das Resultat war ebenfalls negativ. Und doch wird diese Methode vom Fachchemiker viel geübt! Erst, als ich ein größeres Quantum Fruchtwasser, nachdem es mit Natronlauge alkalisch gemacht war — nach dem Erwärmen muss von neuem auf die Reaktion geprüft werden — äußerst vorsichtig veraschte und dann in ganz wenig heißem Wasser löste, erhielt ich durch Zusatz von Stärkekleister und rauchender Salpetersäure eine deutliche Jodreaktion.

Ich halte es nach diesen Erfahrungen nicht für ausgeschlossen, dass das Methylenblau doch auf dem Wege der Transsudation in das Fruchtwasser übergeht, aber entweder in veränderter Form, in der es als Farbstoff überhaupt nicht mehr nachzuweisen ist, oder wie das Jod, an Eiweißstoffe gebunden, die den Nachweis bedeutend erschweren.

Aber selbst, wenn dies so wäre, wäre es für die Folgerungen, die man in Betreff der intrauterinen fötalen Nierensekretion aus dem Verhalten des Methylenblau ziehen konnte, gleichgültig, wofern nur das Methylenblau, wenn es mit dem Urin ins Fruchtwasser entleert wurde, als solches durch Ausschütteln mit Chloroform nachweisbar wäre.

Dass das letztere in der Tat so ist, davon habe ich mich durch das Experiment überzeugt. Ich habe den ersten unmittelbar post partum entleerten Methylenblauhaltigen Urin eines Neugeborenen in Fruchtwasser, das von einer anderen Kreissenden stammte, gegossen, durchgeschüttelt und längere Zeit stehen gelassen. Durch Ausschütteln mit Chloroform konnte ich in der bekannten Weise das Methylenblau nachweisen. Angenommen also, es ginge wirklich Methylenbleu durch Transsudation in das Fruchtwasser über, so ist es jedenfalls mit der von mir geübten Methode nicht nachweisbar, während dies für das mit dem Urin übergegangene der Fall ist.

Das durch Ausschütteln mit Chloroform erhaltene Methylenblau würde also nur das durch die kindliche Niere ausgeschiedene Methylenblau repräsentieren und so mit ein Schluss auf den Anteil, den die Nierensekretion des Fötus an der Fruchtwasserbildung hat, gestattet sein, selbstverständlich nur für die letzte Zeit der Schwangerschaft

Ich kann jedoch bei der geringen Zahl der sicheren Versuchsresultate nur noch einmal betonen, dass Schlüsse, die ich daraus ziehen wollte, gewagt wären, um so gewagter, als man sich bei der Frage nach der Herkunft des Fruchtwassers auf einem Gebiete bewegt, in dem seit Jahrzehnten von vielen Autoren zahllose Vermutungen und Hypothesen aufgestellt sind und auf dem doch so herzlich wenig sicher beobachtete Tatsachen vorliegen. Ein Kapitel der Geburtshilfe, in dem wohl wie in keinem anderen exakte Beobachtungen und ein gut Teil Skeptizismus so sehr von Nöten sind.

Meine Versuche können im allergünstigsten Falle nur einen Weg andeuten, auf dem man, wie Gusserow sagt, “über diesen schwierigen und doch gewiss nicht uninteressanten Gegenstand” Aufklärung erhalten kann.

Zuletzt habe ich noch mit: einem Wort die Hautsekretion des Fötus zu streifen. Es zeigte sich nämlich in allen Fällen, wo das Methylenblau längere Zeit gegeben war, die vernix caseosa (*Käseschmiere*) des Neugeborenen blau gefärbt. Auf den ersten Blick muss man dies für den Beweis einer regelmäßigen Hautsekretion des Fötus halten und muss es für äußerst unwahrscheinlich halten, dass das Methylenblau, das doch auf die Außenfläche des Fötus regelmäßig ausgeschieden wird, sich nicht auch regelmäßig im Fruchtwasser finden sollte.

Es erklärt sich diese Tatsache aber ungezwungen, wenn man bedenkt, dass viele Stoffe, wie z. B. das Carbol (*Phenol*), aus fettigen Lösungen nicht in wässerige übergehen.

Besonders Farbstoffe zeigen dies Verhalten und um einen besonders drastischen Vergleich zu wählen, braucht man nur an die Farbenbeständigkeit der Ölfarbe gegenüber Wasser zu denken. Man kann sich auch durch das Experiment überzeugen, dass auch für vernix caseosa und Fruchtwasser dasselbe statt hat. Ich habe eine größere Menge intensiv blauer vernix caseosa mit Fruchtwasser anhaltend durchgeschüttelt, abfiltriert, mit Chloroform ausgeschüttelt und keine Spur Methylenblau gefunden.

Es ist damit natürlich nicht ausgeschlossen, dass andere Stoffe in Lösung ungehindert durch die Haut diffundieren.

Die Frage nach der Herkunft des Fruchtwassers, nach der fötalen Nieren- und Hautsekretion ist in einer zahllosen Reihe von Experimenten bearbeitet. Es war wohl nicht immer das Interesse und die Wichtigkeit der zu behandelnden Frage allein, was diese Experimente veranlasste, auch nicht immer nur die Unmöglichkeit, die Frage auf anderem Wege zu lösen. Gerade auf diesem Gebiet scheint jedes neue Experiment, ja jede Variation eines alten auf den ersten Blick sichern Erfolg zu versprechen.

Und doch bilden gerade diese Fragen für experimentelle Untersuchungen ein durchaus unergiebiges Feld. Die Faktoren, die mitsprechen, sind zu zahlreich, und zur Gewinnung von sicheren Schlüssen nach der einen oder anderen Richtung hin niemals ganz auszuschließen, die Fehlerquellen chemischer Untersuchung und Technik sind gerade bei Fruchtwasseruntersuchungen, namentlich für den Mediziner, nicht gering anzuschlagen. Der Weg, auf dem diese Fragen nur gelöst werden können, ist der des anatomischen Studiums und der klinischen Beobachtung, nicht der des Experiments.

Anders verhält es sich mit den Untersuchungen über den Stoffwechsel des Neugeborenen; hier ist ein ungleich günstigerer Boden für das Experiment und die chemische Analyse, günstiger noch, wie bei den Stoffwechseluntersuchungen bei Erwachsenen. Die gleichmäßige Nahrung, die das Neugeborene erhält, die individuell so wenig verschiedenen äußeren Bedingungen, unter denen es lebt, die typische Regelmäßigkeit, in der alle Funktionen bei ihm ablaufen, das Fehlen aller nervösen Einflüsse vereinfachen die Technik der Versuche und machen manches Experiment möglich, das beim Erwachsenen unausführbar ist. Auf der anderen Seite finden in der ersten Zeit nach der Geburt wohl noch zweifellos Ausgleichungsvorginge zwischen intrauterinem und extrauterinem Leben statt. Das Studium dieser Ausgleichungsvorginge gestattet jedenfalls mit größerer Sicherheit einen Rückschluss auf das normale physiologische Verhalten, wie dasjenige pathologischer Zustände, die der Physiologe zu seinen Untersuchungen heranzuziehen sich schon längst gewohnt hat.

Es ist deshalb nur zu bedauern, das diesen Stoffwechseluntersuchungen beim Neugeborenen so wenig Aufmerksamkeit geschenkt wird und zwar aus rein äußeren Gründen: Weil dem Physiologen das Material und dem Geburtshelfer die einschlägigen Kenntnisse und Technik des Fachphysiologen mangeln.”

1

Moderna hat dabei festgestellt, dass Methylenblau die Adduktbildung2 wohl unterbindet, die auch in menschlichen Zellen ein Problem sein könnte.

Adduktbildung ist schlecht, Verhinderung von Adduktbildung im Körper also durchaus wünschenswert.

Methylenblau zeigt, je nach zugesetzter Menge, verschiedene Veränderungen im CD (circular dichroism), was auf eine komplexe Wechselwirkung und mehr als eine Art der Bindung hindeutet. Diese Veränderungen sind im Kalorimeter dramatisch und deuten auf globale Veränderung der gesamten mRNA-Struktur.” Dieser Effekt ist jedoch reversibel und verschwindet, sobald das Methylenblau entfernt wird.

Schwer zu sagen, ob das gut oder schlecht ist. Methylenblau macht etwas mit modRNA, verändert sie und scheint sie aber auch zu stabilisieren. Da der Effekt aber reversibel ist, kann damit kein langfristiges Problem entstehen, da der menschliche Körper Methylenblau schnell abbaut bzw. wieder abgibt.

“Es wurden beschleunigte Echtzeit-Stabilitätsdaten generiert, die zeigen, dass Methylenblau ein wirksamer stabilisierender Hilfsstoff für mRNA-Lipid-Nanopartikel (mRNA-LNP)-Zusammensetzungen ist. Insbesondere wurde gezeigt, dass Methylenblau-Konzentrationen im Bereich von 0,5 bis 2 mM die Reinheitsverlustrate von in LNP eingekapseltem mRNA bei Lagerungsbedingungen von 5 °C, 25 °C und 40 °C drastisch hemmen. Dieser Stabilisierungseffekt wurde auch für die eng verwandten Phenothiaziniumverbindungen Azur A, Azur B, Leucomethylenblau und den Azoniumfarbstoff Safranin O nachgewiesen. Die stabilisierende Wirkung von Methylenblau wurde für verschiedene mRNA-Sequenzen und LNP-Lipidzusammensetzungen nachgewiesen. Die Instabilität von mRNA, insbesondere der Reinheitsverlust, gilt als eine der größten Herausforderungen für ihre grundlegende therapeutische und kommerzielle Verwertbarkeit. Darüber hinaus verschlechtert sich die Instabilität von mRNA erheblich, wenn sie als LNP formuliert wird. Umfangreiche Screening-Studien, die zuvor durchgeführt wurden, konnten keine Hilfsstoffe identifizieren, die die Fragmentierungsinstabilität von mRNA verbessern. Da Methylenblau eine geringe Toxizität aufweist, seit über 100 Jahren klinisch eingesetzt wird, als Reagenz in USP-Qualität erhältlich ist und bereits von der FDA als therapeutischer Wirkstoff zugelassen ist, stellt es ein seltenes Beispiel für einen RNA-bindenden Farbstoff dar, der für die Verwendung als pharmazeutischer Inhaltsstoff geeignet ist (Osterberg et al., International Journal of Toxicology 22:377-380 (2003)). Molekulare Farbstoffe sind im Allgemeinen toxisch und werden nicht als pharmazeutische Hilfsstoffe verwendet. Obwohl es Präzedenzfälle für die analytische/biophysikalische Verwendung von Methylenblau und anderen Phenothiaziniumfarbstoffen in Kombination mit RNA und DNA gibt, scheint es keine Präzedenzfälle für RNA-Lipid-Nanopartikel-Zusammensetzungen mit Methylenblau oder verwandten Verbindungen zu geben, ebenso wenig wie für die Verwendung von Methylenblau/verwandten Verbindungen als stabilisierender biopharmazeutischer Hilfsstoff. Die Entdeckung, dass Methylenblau und bestimmte verwandte Verbindungen die mRNA innerhalb des LNP stabilisieren, ist daher unerwartet und beispiellos. Diese Entdeckung ermöglicht mehrere bedeutende Anwendungen, darunter eine verlängerte Haltbarkeit in gekühlter Flüssigkeit, eine verlängerte Verwendungsdauer bei Raumtemperatur und eine verlängerte Verwendungsstabilität bei physiologischen Temperaturen von bis zu 40 °C. Das Erreichen einer stabilen flüssigen Formulierung würde auch kommerziell und therapeutisch wünschenswertere Verpackungs- und Verabreichungsoptionen ermöglichen, darunter Fertigspritzen und Kartuschen für patientenfreundliche Autoinjektoren und Infusionspumpen. Die Einbindung dieser Verbindung in Prozessströme (möglicherweise mit anschließender Entfernung) und das endgültige Arzneimittelprodukt dürften zu einer deutlichen Verbesserung des anfänglichen Reinheitswerts bei der Herstellung führen, was derzeit problematisch ist, da bei der aktuellen großtechnischen LNP-Produktion typischerweise ein Reinheitsverlust von 5–10 % während der LNP-Bildung und -Verarbeitung auftritt. Die Fähigkeit, Lösungen und pharmazeutische Präparate von mRNA mit Methylenblau und ähnlichen Additiven mit geringer Toxizität zu stabilisieren, könnte daher eine wertvolle disruptive Technologie darstellen und eine breitere Verwendung von mRNA-Zusammensetzungen ermöglichen.”

[0083] “Abbildung 3 zeigt einen Vergleich der Stabilität einer Reihe von mRNA-LNP-Proben, die zunehmende Mengen an Thionin- oder Methylenblau-Farbstoffen enthalten und drei Wochen lang zwei Stressbedingungen (RT = Raumtemperatur und 40 °C) ausgesetzt waren. Die Daten sind Fragmentierungsanalysen, die die Reinheit des Hauptpeaks in Prozent angeben. Die Ergebnisse zeigen, dass Thionin den Abbau von mRNA im LNP beschleunigte, während Methylenblau ihn sowohl bei Raumtemperatur als auch bei 40 °C stabilisierte.”

[0084] “Abbildung 4 zeigt die DLS-Charakterisierung von mRNA-LNP-Proben nach 10-tägiger Lagerung bei unterschiedlichen Temperaturbedingungen in Gegenwart unterschiedlicher Konzentrationen von Methylenblau. Diese Ergebnisse zeigen, dass die Anwesenheit von bis zu 6 mM Methylenblau keinen signifikanten Einfluss auf die hydrodynamische Größe der LNP hatte, gemessen mittels DLS, und alle Proben hochgradig monodispers blieben. Diese Daten stützen die Schlussfolgerung, dass die Anwesenheit von bis zu 6 mM Methylenblau die physikalische Stabilität der LNP unter den getesteten Temperaturbedingungen (5 °C, 25 °C und 40 °C) nicht beeinträchtigt.”

[0361] “Angesichts der überraschenden und etwas kontraintuitiven Erkenntnis, dass Methylenblau die Stabilität von mRNA-LNP-Formulierungen erhöht, wurden zusätzliche Experimente durchgeführt. Die Stabilität von mRNA-LNPs in Gegenwart steigender Konzentrationen von Methylenblau wurde nach einer Inkubation bei 5 °C, 25 °C oder 40 °C über einen Zeitraum von 10 Tagen untersucht. Die Methylenblau-Konzentrationen für jede Versuchsbedingung sind in Tabelle 2 aufgeführt. Erste Ergebnisse zeigten, dass bei 40 °C und ohne Methylenblau nach drei Wochen eine nahezu vollständige mRNA-Degradation eintrat, sodass das Experiment nicht über einen längeren Zeitraum fortgesetzt wurde. Zusätzlich zur chemischen Stabilität wurde eine sorgfältige Untersuchung der möglichen Auswirkungen von Methylenblau auf den physikalischen Zustand der LNP mittels dynamischer Lichtstreuung (DLS) durchgeführt. Diese Technik reagiert äußerst empfindlich auf winzige Veränderungen der hydrodynamischen Nanopartikelgröße, insbesondere im Hinblick auf die Bildung größerer Aggregate, die als häufige physikalische Abbauform vieler LNPs bekannt sind. Die Anwesenheit von bis zu 6 mM Methylen blau hatte unter den drei getesteten Temperaturbedingungen keinen Einfluss auf die physikalische Stabilität der mRNA-LNP (Abb. 4).”

[0068] “Abbildung 6 zeigt tabellarische Ergebnisse der Quantifizierung der mRNA-Fragmentanalyse von mRNA-LNP-Proben, die mit unterschiedlichen Konzentrationen von Methylenblau bei Raumtemperatur (RT), 5 °C oder 40 °C inkubiert wurden. Diese Daten entsprechen einer 10-tägigen Exposition gegenüber jeder Temperaturbedingung, gefolgt von einer Lagerung bei 5 °C für 3 Tage vor der Analyse.”

[0087] “Abb. 7A – 7B zeigen die Ergebnisse der LC/MS-Analyse von PEG-Lipid, das 1 Woche lang bei Raumtemperatur () und 5 °C () mit unterschiedlichen Konzentrationen von Methylenblau inkubiert wurde. Die Daten stellen die LC/MS-Signalzählungen für PEG-Lipid (halbgefüllte Kreise) oder Lyso-PEG-DMG-Abbauprodukte (gefüllte Quadrate) dar, normiert auf die Gesamtsignalzählungen (PEG-Lipid+Lyso-PEG-DMG). Diese Daten zeigen, dass steigende Konzentrationen von Methylenblau (0, 0,1, 0,5 und 1 mM) keinen Einfluss auf die Gesamtmenge des PEG-Lipids hatten, das bei beiden Temperaturbedingungen vorhanden war. Die Daten zeigen auch, dass die Anwesenheit von Methylenblau keinen Einfluss auf die Bildung von Lyso-PEG-DMG hat. Die Daten belegen, dass die Anwesenheit von Methylenblau bis zu einer Konzentration von mindestens 1 mM keine signifikanten negativen Auswirkungen auf die Stabilität von PEG-Lipid hat.”

[0090] “Abb. 10A und 10B zeigen die Ergebnisse zweier Arten von Reinheitsanalysen, die auf mRNA-LNP-Proben angewendet wurden. Abb. 10A zeigt die Reinheitsanalyse des Hauptpeaks (Summe der beiden Komponentenpeaks) mittels Umkehrphasenchromatographie (RP). Abb. 10B zeigt die Ergebnisse der Fragmentanalyse von mRNA-LNP-Proben, die 12 Tage lang bei 40 °C oder −80 °C gelagert wurden. Diese Ergebnisse zeigen, dass alle bei −80 °C gelagerten Proben ein gleichwertiges Reinheitsniveau aufwiesen, was darauf hindeutet, dass das Vorhandensein von Methylenblau die Analyse nicht beeinträchtigt. Proben, die vor Licht geschützt gelagert wurden, weisen im Vergleich zu ungeschützten Proben („40 Licht“) deutlich unterschiedliche Stabilitätsprofile auf. Proben, die vor Licht geschützt gelagert wurden („40 Dunkel“), zeigen, dass das Vorhandensein von Methylenblau die mRNA hinsichtlich des Reinheitsverlusts deutlich stabilisierte. Beide Methoden zeigen konsistente Trends, und aus den RP-Ergebnissen lässt sich ableiten, dass das Vorhandensein von Methylenblau keinen negativen Einfluss auf die Bildung von RNA-Lipid-Addukten hat. Die in dieser Studie verwendeten lichtdurchlässigen Bedingungen entsprechen klaren Glasfläschchen, die direkt auf dem Regal in einem 40 °C warmen Ofen vor dessen Glastür platziert wurden.”

[0093] “Abb. 13A-13C zeigen die Gesamtreinheit, bestimmt anhand des Hauptpeak-Prozentsatzes (13A), der mRNA-Fragmentierung (13B) und der mRNA-Adduktbildung (13C) in mRNA-LNP-Zusammensetzungen mit unterschiedlichen Konzentrationen von Methylenblau nach 5 Monaten (151 Tagen) gekühlter Lagerung, analysiert mittels RP-HPLC. Die Daten zeigen, dass bereits Konzentrationen von 0,5 mM Methylenblau die mRNA-Fragmentierungsrate im Vergleich zu LNP-Zusammensetzungen ohne Farbstoff signifikant hemmen. Darüber hinaus gibt es kaum Unterschiede in der Wirkung im Bereich von 0,5 bis 2,0 mM Methylenblau. Die Daten deuten darauf hin, dass eine Konzentration von 1,5 mM hinsichtlich der Hemmung der Adduktbildung optimal ist.”

OK, hier wird es interessant. MB verhindert die Adduktbildung. Vielleicht auch in Zellen von Geimpften, wenn ALC-0315 in der Zelle bleiben sollte?

1,5 mM jedoch, das schafft man nicht im menschlichen Körper. Das sind jedoch SEHR große Mengen.

[0094] “Abb. 14 zeigt die RNA-Integrität in lyophilisierten Pulver-mRNA-LNP-Zusammensetzungen mit und ohne Methylenblau bei verschiedenen Lagertemperaturen (−80 °C, 5 °C und 40 °C). Die Integrität wurde anhand der Fragmentierung, des Hauptpeak-Prozentsatzes und der Adduktbildung bestimmt, gemessen mittels RP-HPLC. Die Daten zeigen, dass Zusammensetzungen, die Methylenblau enthalten, eine verbesserte mRNA-Reinheit aufweisen (30 % gegenüber 22 % Hauptpeak nach 1 Woche bei 40 °C).”

[0099] “Abb. 19 zeigt die Zirkulardichroismus-Spektren von mRNA ohne Methylenblau, mit 210 μM Methylenblau oder mit 367 μM Methylenblau. Die Spektren zeigen je nach Menge des zugesetzten Methylenblau verschiedene Veränderungen, was auf eine komplexe Wechselwirkung und mehr als eine Art der Bindung hindeutet.”

[0100] “Abb. 20 zeigt Differential-Scanning-Kalorimetrie-Thermogramme von 0,3 μM mRNA in Gegenwart von 32,5 mM Natriumacetat, pH 5,0, mit verschiedenen Konzentrationen von Methylenblau. Die Thermogramme zeigen die Wirkung von zunehmenden Mengen an Methylenblau auf die mRNA. Bei 367,8 μM und darüber kommt es zu einer dramatischen globalen Veränderung der gesamten mRNA-Struktur.”

[0103] “Abb. 23 zeigt Differential-Scanning-Kalorimetrie-Thermogramme von 0,3 μM mRNA mit und ohne 100 μM Methylenblau. Die Thermogramme zeigen, dass die Wirkung von Methylenblau auf die Struktur der mRNA durch Dialyse der mRNA zur Entfernung von Methylenblau reversibel ist. Der Pfeil zeigt die Normalisierung der mRNA nach der MB-Dialysekurve auf den Peak der reinen mRNA-Kurve an.”

Die Wissenschaftler von Moderna überraschen mit immer wieder. Die haben es wirklich drauf und finden wirklich innovative Lösungen (anders als Pfizer oder BioNTech).

Was diese Daten für modRNA-modifizierte Lebewesen bedeuten, wenn die modRNA schon generell eher schlecht abbaubar ist, kann ich anhand des Patents nicht beurteilen. Die Veränderung der modRNA -Struktur könnte diese zwar stabilisieren aber so möglicherweise auch inaktivieren, weil sie nicht mehr (so einfach) ablesbar sein könnte.

Das Titel der Arbeit lautete:

“Über die antibakteriellen Wirkungen einiger Anilinfarbstoffe”

Das war damals Grundlagenforschung in welcher die toxikologischen Daten erhoben wurden.

Die Arbeit kann man hier aus dem Archiv laden:

https://www.digitale-sammlungen.de/de/view/bsb11592629?q=%28August+BEckh+Annilinfarbstoffe%29&page=,1

Dieser Artikel ist eine maschinenlesbare Form der Arbeit, um sie auch nicht deutschsprachigen Wissenschaftlern über Google Translate zugänglich zu machen. Ich habe daher die Rechtschreibung modernisiert, da zwischen diesem Text und der Doktorarbeit mittlerweile zwei Rechtschreibreformen liegen.

Diese Doktorarbeit beschreibt, anders als moderne Arbeiten, auch die Fehlversuche und Probleme und präsentiert nicht nur, wie heute üblich, die positiven Endresultate.

Beckh, August Über Die Antibakteriellen Wirkungen Einiger Anilinfarbstoffe

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Einer Anregung von Professor Dr. Penzoldt, der bei seinen Versuchen auf die antibakteriellen Eigenschaften einiger Anilinfarbstoffe aufmerksam geworden war, folgend, unternahm ich es, eine Reihe dieser Substanzen einer genaueren Untersuchung zu unterziehen, in wie weit sie etwa aufhebend, beziehungsweise verzögernd auf die Entwicklung von Bakterien wirkten. Von vorne herein musste es ja von theoretischem Interesse erscheinen, die Farbstoffe, welche zur Färbung von Bakzterienpräparaten die ausgedehnteste Anwendung finden, auch bezüglich ihrer Einwirkung auf lebende Bakterien zu studieren. Wenn ich auch die Hoffnung hegte, in den untersuchten Farbstoffen etwa praktisch verwendbare antibakterielle Mittel zu finden, so trat doch diese Hoffnung im Anfang meiner Versuche nicht in den Vordergrund; denn es war ja zu fürchten, dass diese Substanzen, wenn sie sich auch als bakterienfeindlich erwiesen, doch wegen der sie auszeichnenden starken Färbekraft, eventuell auch wegen etwaiger giftiger Eigenschaften gegenüber dem tierischen Organismus gerade für die Praxis wenig geeignet sein würden. Von dieser Erwägung ausgehend, habe ich mir die Aufgabe gestellt, neben der Einwirkung auf Spaltpilze auch stets die Giftwirkung auf Tiere im Allgemeinen zu untersuchen und speziell in einigen Fällen die höchste zulässige Dosis für den Warmblüter festzustellen.

Was nun die Spaltpilzarten anlangt, die ich zu meinen Versuchen heranzog, so habe ich mir den Staphylokokkus pyogenes aureus und den Bacillus Anthracis ausgewählt, welch beide sich wegen ihrer nicht leicht mit anderen Arten zu verwechselnden Wachstumsvorgänge am besten eigneten; in zweifelhaften Fällen wurde stets das Mikroskop zur Diagnose herangezogen. Ich benützte zu den Versuchen in erster Linie die Methode, welche R. Koch in seiner Arbeit „Über Desinfektion”1 angegeben hat; Beschreibung der Methode folgt bei den einschlägigen Versuchen. Ferner verwandte ich die von Esmarch angegebene „Rollmethode”2 zu meinen Versuchen und noch eine dritte, deren Beschreibung ebenfalls, wie die der beiden vorhergehenden, bei den Versuchen folgt. Bezüglich der Giftigkeit der untersuchten Substanzen wurde als Grundbedingung völlige Arsenfreiheit aufgestellt; ferner wurden nur solche Farbstoffe zur Untersuchung herangezogen, die eine leichte Löslichkeit in Wasser aufzuweisen hatten, weil die Löslichkeit in Wasser eine Hauptvorbedingung ist für die einwandfreie Prüfung auf die antibakterielle Wirkung und auch für die etwaige praktische Verwendung. Zum Maßstab wurde ferner noch genommen, dass man von den betreffenden Farblösungen eine kleine Quantität etwa auf kleine Wund- oder Schleimhautflächen applicieren könnte, ohne die etwaige Giftigkeit der Substanzen fürchten zu müssen, und solche Mengen verleibte ich dann Warmblütern ein und beobachtete dabei die hauptsächlichst auftretenden Allgemeinwirkungen. Bevor nun an die Beschreibung der angestellten Untersuchungen und ihrer Resultate gegangen wird, dürfte eine kurze Charakteristik der chemischen Zusammensetzung, sowie der chemischen Eigenschaften der zu den Versuchen verwandten Farbstoffe am Platze sein. 3

1. Malachitgrün oder Tetramethyldiamidotriphenylcarbinol hat die Formel

C23 H26N2O = [N(CH3)2*C6H4]2 C(C6H5)-OH es wurde von ihm das grüne, in Blättchen kristallisierende, in Wasser leicht lösliche Oxalat verwandt.

2. Vom Fuchsin (Rosanilin, oder Triamidodiphenyltolylcarbinol) wurde ein aus grossen grünlichen, rhombischen Krystallen bestehendes Salz mit der Formel C20H19N3HCl verwandt.

Aus der Reihe der methylierten Rosaniline wurde verwandt:

3. Das unter dem Namen Hofmann’s Violett in den Handel kommende salzsaure Salz des Trimethylrosanilin (C23H27N3O=C20H18(CH3)3N30).

Dasselbe wurde in pulverisiertem Zustande geliefert.

Ferner

4. ein Gemenge von Tetra-, Pendia- und Hexamethylrosanilin, unter dem Namen „Methylviolett” im Handel vorkommend, als Pulver.

Aus der Reihe der Rosaniline wurde ferner noch verwandt:

5. Das Triphenylrosanilin (Phenylblau) C20H19(C6H5)3N3O

und zwar das in Wasser leicht lösliche Natriumsalz der Triphenylrosanilindisulfonsäure, ebenfalls ein pulverisiertes Präparat.

6. Das in großen Stücken von dunkelroter Farbe von der Fabrik gelieferte Corallin ist ein Gemenge von C19H13O2NH2+C19H12O(NH2)2.

Dasselbe ist in Wasser leicht löslich.

Aus der Reihe der Fluoresceine wurden untersucht:

7. Das Tetrabromfluorescein oder Eosin C20H8Br4O5 und zwar dessen leicht wasserlösliches Kaliumsalz.

Ferner

8. Das Tetrajodfluorescein C20H8J4O5

und zwar dessen unter dem Namen Rose Bengale (Anmerkung: Heute Bengalrosa) im Handel vorkommendes Natriumsalz; es zeichnet sich durch große Löslichkeit in Wasser im Verhältnis zu den üblichen Farben aus. Beide Präparate, sowohl Eosin wie Rose Bengale, wurden in pulverisiertem Zustande gesandt.

9. Ein unter dein Namen Methylorange im Handel befindlicher Farbstoff ist seiner chemischen Zusammensetzung nach dimethylamidoazobenzolparasulfosaures Natrium aus

CH3

NC6H4 — N(Helianthin) entstanden als NC6H4SO3Na.

CH3

Das Präparat ist pulverisiert.

Aus der Gruppe der Azoderivate wurde ferner

10. ein Salz des Triamidoazobenzol verwandt , das sogenannte Vesuvin oder Bismarckbraun NH2C6H4N-N-C6H3(NH2)2. Dasselbe ist ein schwarzbraunes Präparat.

Das von uns benützte war pulverisiert.

Aus obengenannter Gruppe wurden weiter verwandt,

11. das Kaliumsalz der Diphenylamidoazobenzolsulfonsaure C18H15N3S03.

Das in kaltem Wasser nur sehr gering lösliche Salz KC18H14N3SO3 befindet sich als hellgelbes Pulver unter dem Namen Tropaeolin im Handel.

Ein 4. Azoderivat ist

12. das beta Naphtol-azo-benzol-azo-benzoldisulfosaure Natrium C22H16N4O7 im

Handel unter dem Namen Scharlachrot oder Biebricher Scharlach eingeführt. Das Präparat befand sich in pulverisiertem Zustande.

Eine weitere Azoverbindung ist

13. das Diphenyltetrazo-alpha-naphthylaminsulfosaure Natrium mit der Formel

unter dem Namen „Congorot” im Handel bekannt; das benutzte Präparat war pulverisiert.

14. Rubinrot , in pulverisiertem Zustand, ist ein arsenfreies Fuchsinpräparat.

15. Indulin entsteht wie Tropaeolin aus der Diphenylamidoazobenzolsulfonsäure es hat die Formel C18H15N3

und ist ein Anilinsalz genannter Säure; von der Fabrik wurde es als Pulver geliefert. 16. Methylenblau C16H18N3SHCl

ist ein in Wasser leicht lösliches Pulver von tiefdunkelblauer Farbe.

Zu den Versuchen wurden zuerst, soweit es angängig war, 0,2 % Lösungen verwandt, bei den späteren Versuchen gesättigte Lösungen bei den meisten war mir das Prozentverhältnis genau bekannt; wo dies nicht der Fall war, bemerkte ich es an betreffender Stelle mit der Bemerkung „nahezu”. Alle Lösungen wurden mit destilliertem Wasser hergestellt.

Die Präparate waren aus den chemischen Fabriken von E. Merck. in Darmstadt und C. A. F. Kahlbaum in Berlin bezogen und zwar 1, 2, 4, 5, 8, 9, 12, 14 und 15 aus ersterer und 3. 6, 7, 10, 11, 13 und 16 aus letzterer.

Die erste Reihe von Versuchen wurde nun nach der Koch’schen Fadenmethode in folgender Weise angestellt. Mittelst einer Platinöse wurde einer Reinkultur von Staphylokokkus pyogenes aureus auf Fleischwasserpeptongelatine eine geringe Menge entnommen und in einem Uhrschälchen in 1-2 Tropfen. destillierten Wassers verrieben. Mit dieser Mischung wurden circa 1 cm. lange, feine, weiße Fäden getränkt und bis zur gänzlichen Antrocknung unter einer Glasglocke stehen gelassen. Die auf diese Weise präparierten Fäden wurden rum 10 Minuten lang mit den Farblösungen in Berührung gebracht und zwar wurden zu dieser ersten Versuchsweise, soweit es die Umstände erlaubten, lauter 0,2 % Lösungen verwandt; bei Fuchsin und Methylorange blieb ein kleiner Rückstand, während Tropaeolin sich nur zu 0,05 % löste. Nach der Färbung wurde die überschüssige Farbe möglichst entfernt und die Fäden darauf auf in sterilisierten Schälchen verwahrte Fleischwasserpeptongelatine aufgelegt, je 1-2 von jeder Farbe, und dann bei Zimmertemperatur sich selbst überlassen. Zu gleicher Zeit wurden Kontrollproben hergestellt dadurch, dass einige der Fäden nach der Antrocknung noch mit destilliertem Wasser getränkt wurden und ebenfalls auf Gelatine verbracht wurden. Immer nach 24 Stunden wurde das Wachstum kontrolliert; die Resultate sind in der folgenden Tabelle I aufgezeichnet.

Erwähnt muss noch werden, dass es leider nicht möglich war, aus verschiedenen Gründen, für jede einzelne Farbe ein besonderes Schälchen zu nehmen, sondern es mussten immer mehrere Fäden in eine Schale gelegt werden, wenn auch möglichst weit von einander es kam dadurch manchmal zu Unzuträglichkeiten, die jedoch im Allgemeinen nicht störend auf die Versuche einwirkten; im Gegenteil sogar einige Male bestätigend für andere Resultate wirkten.

Bei den meisten am 2. Tage starke Entwicklung ; bei einigen, die sehr nahe an mit Farbe getränkten Fäden liegen, oder zu denen etwas von der Farbe herübergeflossen ist, keine Entwicklung, z. B. bei Malachitgrün.

Die Resultate dieses ersten Versuches ergaben also zunächst völlige Unwirksamkeit gegen den Staphylococcus pyogenes aureus für Indulin, Congorot und Scharlachrot, weshalb diese drei Farbstoffe bei den weiteren Untersuchungen ganz außer Acht gelassen wurden. Zweifelhaft blieb die Entwicklung am 2. Tage , d. h. also nach 24 Stunden, bei Methylorange und Rubinrot; doch wurden auch diese beiden, nachdem am 3. Tage sehr starke Entwicklung eingetreten war, nicht zu weiteren Versuchen verwandt. Von den übrigen Farbstoffen erwiesen sich als einen Tag verzögernd in ihrer Wirkung: Tropaeolin (in gesättigter Lösung) und Eosin; 2 Tage: Vesuvin; 3 Tage: Rose Bengale, Corallin und Methylenblau; bei letzterem entwickelten sich am 5. Tage statt Pyogenes Schimmelpilze.

Am 5. Tage waren noch völlig frei von jeder Entwicklung: Methylviolett, Malachitgrün, Phenylblau und Trimethylrosanilin.

Eine längere Zeit wurde dieser Versuch nicht beobachtet, da schon diese kurze Zeit einen Schluss auf die Wirksamkeit beziehungsweise Unwirksamkeit zuließ.

Es wurden demgemäß weitere Versuche nur mit den Farben unternommen, die bis am 2. Tage noch kein Wachstum gezeigt hatten.

Es waren dies, um sie zusammenzufassen : 1. Methylviolett, 2. Malachitgrün, 3. Phenylblau, 4. Trimethylrosanilin, 5. Methylenblau, 6. Rose Bengale, 7. Fuchsie, 8. Corallin, 9. Vesuvin, 10. Eosin und 11. Tropaeolin.

Von diesen Farben wurden nun gesättigte Lösungen hergestellt; der Grad der Konzentration ist stets bei den einzelnen Tabellen angegeben.

Mit diesen gesättigten Lösungen wurde nun ganz in der gleichen Weise wie bei dem ersten Versuche verfahren; nur wurden diesmal die Fäden nicht zehn Minuten der Einwirkung der Farben überlassen, sondern nur eine Minute, da es ja natürlich vom höchsten Interesse in jeder Beziehung sein musste, die möglichst kürzeste Frist herauszuprobieren, in der den Farbstoffen noch eine Einwirkung auf Bakterien und speziell auf den Staphylokokkus pyogenes aureus zukäme. Die Resultate sind in Tabelle II zusammengestellt.

Eine Zusammenfassung der Resultate dieses Versuches ergibt Folgendes:

Am zweiten Tage zeigte sich nirgends Entwicklung, auch an den Kontrollproben nicht. Am dritten Tage beginnt die Entwicklung aufzutreten bei Corallin und Eosin, welche sich schließlich bei ersterem kolossal ausbreitet; ebenso zeigten die Kontrollproben ein üppiges Wachstum.

Am vierten Tage beginnt die Entwicklung bei Tropaeolin und am fünften Tage bei Vesuvin und Fuchsin, bei welch’ letzterem sich auch Schimmel zeigte. Diese eben besprochenen fünf Farben wurden zu einer weiteren Untersuchung nicht mehr herangezogen; dennoch geht aus diesem Versuche hervor, dass wenigstens Tropaeolin, Vesuvin und Fuchsin ohne Zweifel im Stande sind, auf die Entwicklung des Staphylokokkus pyogenes aureus für kürzere Zeit einen hemmenden Einfluss auszuüben.

Am achten Tage zeigte sich bei Methylenblau Beginn der Pyogenes - Entwicklung und bei Rose Bengale und Phenylblau Schimmelentwicklung; wahrscheinlich waren bei der täglichen Kontrolle trotz aller Vorsicht Keime aus der Luft in das Schälchen geflogen.

Trimethylrosanilin konnte, ebenso wie Methylviolett, nachdem beide fünf Tage lang völlig frei geblieben waren, leider nicht mehr beobachtet werden wegen der starken Verflüssigung der Gelatine, hervorgerufen durch die enorme Pyogenes-Entwicklung beim Eosin.

Malachitgrün konnte bis zum 12. Tage beobachtet werden trotz starker Verflüssigung in seinem Schälchen; es schwamm nach dem 12. Tage völlig frei in der reichliche Pyogenes - Entwicklung zeigenden verflüssigten Gelatine umher.

Dieser Versuch wurde noch zwei Mal wiederholt, wieder mit gesättigten Lösungen und einer einminütenlichen Farbeneinwirkung. Diese Versuche wurden jedoch nur mehr auf: 1. Methylviolett, 2. Malachitgrün, 3. Trimethylrosanilin, 4. Rose Bengale, 5. Phenylblau und 6. Methylenblau als die bis jetzt wirksamsten ausgedehnt. Die Resultate finden sich in den beiden folgenden Tabellen III und IV enthalten.

Am 10. Tage hörte Beobachtung bei diesen Versuchen auf; Methylviolett, Malachitgrün, Rose Bengale und Phenylblau zeigten während der ganzen Beobachtungszeit sich frei von jeglicher Entwicklung. Trimethylrosanilin blieb bis zum fünften Tage frei von da an zeigte sich geringe Schimmelentwicklung, welche am siebenten Tage zu einer sehr starken wurde. Methylenblau zeigte auch hier wieder Schimmelentwicklung und zwar war schon Verdacht auf dieselbe am dritten Tage, sichere Entwicklung am vierten Tage vorhanden. Die wie immer mit destilliertem Wasser hergestellte Kontrollprobe zeigte am dritten Tage (nach 48 Stunden) üppiges Wachstum.

Eine Zusammenfassung dieser Resultate ergibt: Methylviolett, Malachitgrün und Rose Bengale sind vollständig frei geblieben bis zum 15. Tage; von da an nicht mehr beobachtet. Bei Phenylblau, das beim letzten Versuch sich ebenfalls bis zum 10. Tage frei gehalten hatte, zeigte sich diesmal am Tage Beginn von Schimmelentwicklung; Trimethylrosanilin blieb diesmal bis zum 7. Tage frei; von da an entwickelten sich Schimmelpilze; wahrscheinlich dürfte dies ebenfalls auf ein Hineinfallen von Keimen bei der Kontrolle zu beziehen sein; bei Methylenblau zeigte sich schon am 3. Tage Schimmelentwicklung. Da nun bei dieser Farbe sich mit einer einzigen Ausnahme (siehe Tabelle VI) früher oder später stets Schimmelpilzentwicklung gezeigt hatte, so konnte die Schuld nicht allein daran liegen, dass bei der Kontrolle aus der Luft Keime in die Schälchen etwa aufgenommen wurden, sondern sie musste mit größter Wahrscheinlichkeit an der Lösung selbst liegen. Es wurden deshalb ebenso wie für Phenylblau, das ebenfalls schon öfters Schimmel gezeigt hatte, neue Lösungen bereitet und dieselben vor dein Gebrauch noch einmal aufgekocht. Mit diesen Lösungen wurde nun der Versuch wiederholt; ebenso wurde der Versuch mit Trimethylrosanilin wiederholt, das zwei Mal Schimmelpilzentwicklung gezeigt hatte, jedoch mit der alten Lösung. Die Resultate sind in Tabelle IVa aufgezeichnet.

Bei diesem Versuch trat Pyogenesentwicklung auf am 4. Tage bei Trimethylrosanilin, am 5. Tage bei Phenylblau. Methylenblau hatte sich frei erhalten 5 Tage lang, doch musste wegen starker Verflüssigung der Gelatine im Schälchen die Kontrolle aufgegeben werden. Die Kontrollprobe zeigte Entwicklung am 3. Tage. Schon jetzt lässt sich aus den bisherigen Versuchen der Schluss ziehen, dass Methylviolett, Malachitgrün und Rose Bengale in gesättigten Lösungen bei Einwirkung von nur einer Minute sicher aufhebend auf die Entwicklung des Pyogenes aureus wirken; ob Trimethylrosanilin, Phenylblau und Methylenblau (lies auch tun, darüber lässt sich erst nach den späteren Versuchen ein sicheres Urteil bilden; hemmend wirken sie aber ohne Zweifel in hohem Grade. Die bisherigen Versuche mit Staphylokokkus pyogenes aureus wurden nun in der Weise modifiziert, dass die Fäden, nachdem sie eine Minute der Farblösung ausgesetzt waren, eine Minute in destilliertem Wasser ausgewaschen wurden, um nach Möglichkeit die überschüssige Farbe zu entfernen; diese Manipulation wurde deshalb vorgenommen, weil bei den bisherigen Versuchen die stark färbenden Substanzen, da natürlich ohne Wasser das Überschüssige nicht genügend entfernt werden konnte, in die Gelatine diffundierten und so eine längere Einwirkung auf die Fäden als beabsichtigt zu Stande kam, und die eigentliche Absicht war ja, möglichst kurze Fristen für die Einwirkung der färbenden Substanzen zu gewinnen. Der gleiche Versuch wurde noch in der Weise angestellt, dass die Fäden in der Farblösung 3 Minuten blieben und dann 3 Minuten in destilliertem Wasser ausgewaschen wurden. Alle übrigen Details waren bei beiden Versuchen analog den vorhergehenden. Die Resultate dieser Versuche sind in den Tabellen V und VI zusammengestellt.

Die Resultate ergeben für Methylviolett, Malachitgrün, Rose Bengale und Trimethylrosanilin bis zum 11. Tage völlige Freiheit von irgend einer Entwicklung. Phenylblau blieb bis zum 8. Tage frei, an welchem die von Methylenblau ausgehende Schimmelentwicklung auf erstere Farbe übergriff.

Aus den nämlichen Gründen, welche zu einer Wiederholung einiger Versuche, welche in Tabelle IV aufgezeichnet waren, drangen, wurde auch hier für Phenylblau und Methylenblau demgemäß mit den frischen Lösungen der Versuch wiederholt. Die Resultate sind in Tabelle V a zusammengestellt.

Fünf Tage lang frei blieb bei diesem Versuche Methylenblau; von da ab musste die Kontrolle aufgegeben werden. Phenylblau zeigte diesmal schon am 5. Tage Pyogenesentwicklung.

Wie schon oben erwähnt, wurde dieser Versuch auch so angestellt, dass als Zeitdauer für Färbung und Auswaschung in destilliertem Wasser je 3 Minuten angenommen wurden.

Tabelle VI zeigt die Resultate an.

Eine Zusammenfassung der in dieser Tabelle verzeichneten Resultate ergibt: Methylviolett, Malachitgrün, Rose Bengale, Trimethylrosanilin und Phenylblau sind bis zum 11. Tage völlig frei von jeder Entwicklung geblieben; die Kontrollprobe zeigte nach dreimal 24 Stunden üppiges Wachstum. Methylenblau blieb bis zum 4. Tage frei, von wo an es Schimmelpilzentwicklung zeigte; es wurde daher für dasselbe mit der oben erwähnten frischen Lösung der Versuch wiederholt. In Tabelle VIa sind die diesbezüglichen Resultate verzeichnet.

Nach 5 Tagen, während welcher Zeit sich nur an der Kontrollprobe Pyogenesentwicklung zeigte, musste dieser Versuch aufgegeben werden.

Das Ergebnis der Resultate von Tabelle V und VI ist folgendes: In konzentrierten Lösungen bei der kurzen Dauer der Einwirkung von 1 respektive 3 Minuten wirken sicher aufhebend für den Staphylokokkus pyogenes aureus: Methylviolett, Malachitgrün, Rose Bengale und Trimethylrosanilin. Phenylblau dürfte mir als stark verzögernd an-genommen werden wegen des Resultats bei V a; trotzdem in Tabelle VI während der langen Beobachtungszeit von zehn Tagen sich ebenso wie bei den vier obengenannten kein Wachstum gezeigt hatte und auch bei dem vorhergehenden Versuche erst am 9. Tage durch Überwuchern von Methylenblau her sich Schimmel gezeigt hatte. Die aufhebende Wirkung des Methylenblau lässt sich noch nicht mit Sicherheit beweisen; erst die späteren Versuche werden hierin Klarheit bringen; eine Hemmung auf die Entwicklung des Pyogenes aureus dagegen geht schon mit Sicherheit auch aus diesen Versuchen hervor.

Ein Versuch anderer Art wurde nun mit der von Esmarch angegebenen Rollmethode veranstaltet.

Es wurde Bouillon aus Rindslende ganz in derselben Weise, wie es von R. Koch zur Bereitung der Fleischwasserpeptongelatine und des Agar-Agar angegeben wurde, zubereitet, nur mit Weglassung des Peptons. Von dieser natürlich sorgfältig sterilisierten Bouillon wurden etwa 4 ml in ein gleichfalls sterilisiertes Reagenzrohr gegossen und nun mittels einer vorher geglühten Platinnadel von einer auf Gelatine gezüchteten Reinkultur des Staphylokokkus pyogenes aureus etwas in die Bouillon übergeimpft; das Reagenzröhrchen samt Inhalt wurde nun im Brutofen einer Temperatur von 39 Grad ausgesetzt. Schon nach wenigen Stunden zeigte sich die Entwicklung des Staphylokokkus durch deutliche Trübung an, welche nach 24 Stunden sehr stark geworden war. Nach diesen vorbereitenden Schritten wurden nun die konzentrierten Lösungen von Methylviolett, Malachitgrün, Rose Bengale, Trimethylrosanilin, Phenylblau und Methylenblau, den 6 Farbstoffen, welche auch zuletzt nur noch zu den Fadenversuchen genommen worden waren, zu gleichen Teilen mit sterilisıerter Bouillon, je 2 ml circa von beiden, in sterilisierten Reagenzröhrchen innig gemischt, in diese Mischung wurde nun eine Platinöse voll von der Tags zuvor geimpften und ım Brutofen entwickelten Bouillonkultur hineingebracht und diese 6 Röhrchen wurden wieder in den Brutofen, der eine Temperatur von 39 Grad hatte, verbracht und 24 Stunden stehen gelassen. Zu gleicher Zeit wurde von der vorerwähnten Bouillonkultur in neue Bouillon zur Kontrolle mittelst der Platinöse eine kleine Menge gebracht, um die Entwicklungsfähigkeit der gezüchteten Kultur nachzuweisen. Aus den gesättigten Lösungen der Farbstoffe waren nun selbstverständlich durch die Versetzung mit Bouillon halbgesättigte Lösungen geworden, was natürlich bei der Beurteilung der späteren Resultate von Wichtigkeit ist. Methylviolett wirkte jetzt in 1% Lösung, Malachitgrün in 2%, Rose Bengale in nahezu 5 %, Trimethylrosanilin in 0,1 % nahezu, Phenylblau in nahezu 2% und Methylenblau in 1,5% Lösung. Nach 24 Stunden wurde dann von diesen, mit Pyogenes versetzten Bouillon- Farbstoffmischungen je 1 Tropfen mit cırca 1-2 ml verflüssigter Fleischwassergelatine zusammengebracht und diese Masse nach inniger Mischung durch Rollen gleichmäßig an die Wände des Reagenzrohres verteilt, was, um schnelleres Erstarren herbeizuführen, in Eiswasser geschah. Die sich etwa entwickelnden Bakterien waren dadurch fein über die ganze Oberfläche der Gelatine verteilt. In gleicher Weise wurde eine Kontrollprobe auf Gelatine aus der Tags zuvor geimpften Bouillonkultur, die sich ebenfalls wie die erste stark entwickelt hatte, hergestellt. Die sämtlichen Proben wurden nun bei Zimmertemperatur sich selbst überlassen und je nach 24 Stunden die Resultate aufgezeichnet, welche in folgender Tabelle (Nr. VII) enthalten sind.

Dieser Versuch zeigte das äußerst günstige Resultat, dass in keinem der Reagenzröhrchen, mit alleiniger Ausnahme der Kontrollprobe, die eine sehr starke Entwicklung des Pyogenes aufzuweisen hatte, bis zum 8. Tage etwas gewachsen war, trotzdem nur halbgesättigte Lösungen zu diesem Versuche verwandt worden waren; jedoch muss hierbei auch der Umstand berücksichtigt werden, dass die Farblösungen 24 Stunden auf den Staphylokokkus pyogenes aureus eingewirkt hatten, während bisher zehn Minuten die höchste Zeıt der Einwirkung gewesen waren. Am 9. Tage zeigten sich in den Röhrchen mit Trimethylrosanilin eine große Anzahl punktförmiger, weißer Kulturen; bei Phenylblau glaubte ich am 9. Tage eine einzige entdecken zu können; sichere Entwicklung trat erst am 11. Tage auf. In halbgesättigten Lösungen wirken demnach sicher aufhebend Methylviolett, Malachitgrün, Rose Bengale und Methylenblau; stark verzögernd Trimethylrosanilin und Phenylblau. Schließlich wurde noch nachstehender Versuch mit dem Staphylokokkus pyogenes aureus und mit vier Farbstoffen, nämlich Methylviolett, Malachitgrün, Methylenblau und Rose Bengale angestellt.

Es wurden immer je 2 bıs 3 ml Fleischwasserpeptongelatine in sterilisierten Reagenzgläsern verflüssigt, und die verflüssigte Gelatine nun innig mit circa zwei Tropfen der gesättigten Farbstofflösungen gemischt. Durch diese Mischungen wurde natürlich eine sehr starke Verdünnung der gesättigten Lösungen hervorgebracht, welche sich annähernd wie folgt berechnete: für Methylviolett ergab sıch ein Prozentgehalt von 0,07 (auf den Tropfen von 0,05 Flüssigkeit 0,001 Substanz gerechnet, und je zwei Tropfen auf 3 ml verteilt); für Malachitgrün stellte sich der Prozentgehalt auf 0,133 (Ausrechnung wie oben; der Tropfen wurde immer zu 0,05 angenommen); für Methylenblau rechnete sich ein Prozentgehalt von 0,1 aus, und für Rose Bengale eın solcher von 0,33 .....

Auf diesem ın Eıs rasch zum Erstarren gebrachten Nährboden wurde dann mittelst der Platinnadel eine Stichkultur von Staphylokokkus pyogenes aureus hergestellt, und bei Zimmertemperatur alle 24 Stunden der Beobachtung unter-zogen. Eine Kontrollprobe auf reine Gelatine wurde ebenfalls geimpft. Tabelle VIII zeigt die Resultate dieses Versuches an.

Tabelle. VII

Zusammenfassung: Methylviolett, Malachitgrün und Methylenblau zeigten bis zum 26. Tage, also der ganzen bisherigen Beobachtungszeit, keine Entwicklung; Rose Bengale wies am 4. Tage geringe Entwicklung von Pyogenes auf, welche nur äußerst langsam in die Tiefe fortschritt. Dieses Resultat steht scheinbar im Widerspruch mit den bisherigen, bei denen sich bei Rose Bengale fast nie Entwicklung gezeigt hatte; doch muss bedacht werden, dass es sich hier um einen sehr geringen Prozentgehalt (0,33) handelt, und es hatte sich ja schon bei dem ersten Versuche mit 0,2% Lösungen am 5. Tage deutliche Entwicklung gezeigt. Die Schlussfolgerung aus diesem Versuche ist: Methylviolett, Malachitgrün und Methylenblau wirken auch noch in Lösungen mit sehr geringem Prozentgehalt entschieden aufhebend auf die Entwicklung des Staphylokokkus pyogenes aureus; Rose Bengale, das in konzentrierten Lösungen den gleichen Einfluss ausübt, vermag dies mit dem geringen Prozentgehalt von 0,33 % nicht mehr, sondern ist lediglich im Stande, für kurze Zeit einen verzögernden Einfluss auszuüben. Das Endergebnis der sämtlichen mit dem Staphylokokkus pyogenes aureus ist demnach kurz folgendes: Sicher aufhebend auf seine Entwicklung wirken Methylviolett, Malachitgrün und Methylenblau. Rose Bengale wirkt nur in gesättigten und halbgesättigten Lösungen aufhebend, in schwachen dagegen nur verzögernd; Trimethylrosanilin wirkt nur in gesättigten Lösungen aufhebend, in schwächeren dagegen stark verzögernd; Phenylblau wirkt in gesättigten Lösungen nur stark verzögernd, ebenso in schwächeren. Es musste nun nach diesen Resultaten gewiss von hohem Interesse sein, die Einwirkung der Farben auch auf andere pathogene Pilze zu untersuchen, und ich wählte hierzu aus schon obenerwähnten Gründen den Bacillus Anthracis.

Mit Milzbrand wurden nur Versuche nach der Koch’schen Fadenmethode angestellt. Die Fäden wurden mutatis mutandis (Anmerkung: mutatis mutandis = mit den nötigen Abänderungen) ganz in gleicher Weise präpariert wie bei Staphylokokkus pyogenes aureus. Zur Untersuchung wurden jedoch nur konzentrierte Lösungen verwendet, und von vorneherein alle diejenigen Substanzen ausgeschlossen, welche sich gegen den Staphylokokkus pyogenes aureus gar nicht oder nur sehr wenig wirksam gezeigt hatten.

Es wurden demnach zur ersten Versuchsreihe ausgewählt:

1. 1. Methylviolett 2%,

2. 2. Malachitgrün 4%

3. Trimethylrosanilin 0,2%

4. Methylenblau 3%

5. Fuchsin 0,3 %

6. Corallin 2%

7. Vesuvin 2 %

8. Eosin 2 %

9. Tropaeolin 0,05%.

Die mıt Milzbrand getränkten Fäden wurden eıne Minute in die Farbe gelegt und dann auf Fleischwasser-pepton-Agar-agar verbracht. Am 1. Tage standen die Schälchen im Brutofen bei 40 Grad, und von da an im Zimmer bei circa 20 Grad; Kontrollprobe wurde wie immer angelegt. Die Resultate zeigt Tabelle IX an.

Zusammenfassung: Schon nach 24 Stunden gedieh bei Fuchsin, Corallin, Vesuvin, Eosin und Tropaeolin eine typische Milzbrandkultur in üppiger Weise; es wurden deshalb, um ein langsameres Wachstum herbeizuführen, die Schälchen aus dem Ofen genommen und bei Zimmertemperatur, die eine zur Milzbrandentwicklung nötige Höhe von circa 20 Grad hatte, aufgestellt; auch bei dieser Temperatur ging die Entwicklung rüstig vorwärts. — Obige fünf Farben wurden auf Grund dieser Resultate von jeder weiteren Untersuchung ausgeschlossen.

Bei Trimethylrosanilin zeigte sich auch schon am 2. Tage Entwicklung, aber so sehr langsam, dass entschieden eine Verzögerung des Wachstums anzunehmen war, weshalb auch mit dieser Farbe weiter experimentiert wurde. Der Grund der Entwicklung mag wahrscheinlich daran gelegen sein, dass in nächster Nähe im Schälchen starke Entwicklung eingetreten war, und die Substanz wohl die Kraft gehabt hatte, die Bazillen des eigenen Fadens unwirksam zu machen, aber nicht mehr im Stande war, dem sich an anderer Stelle frisch entwickelnden Bacillus zu widerstehen.

Bei Malachitgrün zeigte sich auch am 2. Tage die Entwicklung einer Kultur; leider versäumte ich es, hier mikroskopische Untersuchung eintreten zu lassen; doch berechtigen die späteren Versuche, die eine eminente Milzbrandfeindlichkeit des Malachitgrün nachwiesen, zu der Annahme, dass es sich in diesem Falle auch nicht um Anthrax gehandelt haben konnte. Gänzlich frei blieben während der ganzen Beobachtungszeit von zehn Tagen Methylviolett und Methylenblau. Der gleiche Versuch wurde nunmehr lediglich mit Methylviolett, Malachitgrün, Trimethylrosanilin und Methylenblau angestellt, und zwar in einem großen Schälchen bei Zimmertemperatur 15 bis 20 Grad. In Tabelle X sind die Resultate verzeichnet. Kontrollprobe wurde wie in allen vorangehenden Fällen angelegt.

Aus diesem Versuche ergibt sich, dass Methylviolett und Malachitgrün vollständig frei geblieben sind; selbst als nach 18 Tagen das Schälchen mir noch einmal in die Hände kam, waren diese beiden Farben, resp. deren Fäden trotz reichlicher Anthraxentwicklung bei der Kontrollprobe einerseits und reichlicher Schimmelentwicklung anderseits vollständig von jeglicher Entwicklung freigeblieben. Methylenblau zeigte am 6. Tage Schimmelentwicklung, Trimethylrosanilin am 5. Tage. Der Grund, warum bei der Kontrollprobe erst am 5. Tage sich Milzbrandentwicklung nachweisen ließ, war der, dass vom Methylviolett an den Kontrollfaden etwas herüber diffundiert war, was begreiflicherweise nach den bisherigen Resultaten verzögernd wirken musste.

Der letzte Versuch wurde noch einmal wiederholt, und zu demselben auch die konzentrierten Lösungen von Phenylblau (4% nahezu) und Rose Bengale (nahezu 10 %) heran- gezogen. Tabelle XI referiert über die Resultate.

Die Resultate dieses Versuches ergaben bis zum 10. Beobachtungstage für sämtliche sechs Farben Freiheit von Milzbrandentwicklung. Die Ergebnisse der Versuche, die Fäden nur eine Minute in konzentrierten Lösungen zu lassen, sind nun bis Jetzt kurz folgende: Entschieden aufhebend wirken Methylviolett und Malachitgrün, wahrscheinlich auch Methylenblau; Trimethylrosanılin, das beim ersten Versuche langsame Entwicklung gezeigt hatte, bei den beiden anderen bei kurzer Beobachtungszeit keine, darf wegen des ersten negativen Ausfalles nur zu den verzögernden gerechnet werden; Phenylblau und Rose Bengale können bis jetzt lediglich als entwicklungshemmend bezeichnet werden. Die gleichen Erwägungen, die mich bei den Versuchen mit Staphylococcus pyogenes aureus geleitet hatten, bestimmten mich auch bei diesen Untersuchungen, nach der Durchtränkung mit dem Farbstoff die Fäden in destilliertem Wasser auszuwaschen, und zwar wurden einmal die Fäden eine Minute der Farbe und eine Minute dem destillierten Wasser, und ein andermal die Fäden je drei Minuten der Farbe und dem destillierten Wasser ausgesetzt. Die Resultate sind im Tabelle XIL und XIIL zusammengestellt.

Die Resultate ergeben: Völlig frei bleiben bis zum 10. Tage Methylviolett, Malachitgrün, Trimethylrosanilin und Phenylblau. Am 4. Tage entwickelt sich der Milzbrand bei Methylenblau, und schon nach 24 Stunden ist üppige Entwicklung bei Rose Bengale vorhanden. Die Versuche mit dreiminutenlicher Dauer sind in folgender Tabelle (XIIL) enthalten.

Die Resultate sind die gleichen wie die des vorigen Versuches; nur zeigt sich die Milzbrandentwicklung bei Methylenblau schon am 3. Tage. Eine Zusammenfassung sämtlicher Versuche gibt, soweit es sich bis jetzt übersehen lässt, kurz folgendes Ergebnis: Sicher aufhebend in konzentrierten Lösungen wirken, auch nachdem durch die Auswaschungen nur eine ganz kurze Einwirkungszeit erzielt war, Methylviolett, Malachitgrün und Phenylblau; Methylenblau wirkt nur aufhebend bei einer Einwirkung von einer Minute ohne nachgängige Auswaschung; für ganz kurze Fristen kann es nur als verzögernd bezeichnet werden; Trimethylrosanilin hatte nach Tabelle IX anfangs verzögernde Wirkung ausgeübt. Bei den späteren Versuchen blieb es stets von Entwicklung frei. Die schon bei Besprechung der Tabelle IX gepflogenen Erwägungen können der Farbe nur die Eigenschaft einer Starken Verzögerung zuerkennen. Rose Bengale wirkt kaum hemmend, wenigstens nicht bei ganz kurzer Einwirkung.

Nachdem der eigentliche Zweck meiner Aufgabe, die antibakteriellen Wirkungen der Farbstoffe zu untersuchen, erfüllt war, blieb mir noch die weitere Aufgabe, die untersuchten Substanzen in ihrer Wirkung auf den tierischen Organismus der Beobachtung zu unterstellen, da ja von dem Ausfall dieser Versuche ihre etwaige praktische Verwertbarkeit abhängen muss.

Zu diesen Versuchen wurden lediglich nur die auch zu den engeren, antibakteriellen Untersuchungen verwandten Farbstoffe benützt, also Methylviolett, Malachitgrün, Rose Bengale, Trimethylrosanilin, Phenylblau und Methylenblau.

Es wurden zunächst Injektionsversuche an Fröschen gemacht und diesen Tieren jedes mal eine bestimmte Quantität stets in den Rückenlymphsack eingespritzt, und zwar meistens 1—2 Teilstriche der Pravaz’schen Spritze. Die Lösungen waren meist konzentriert.

Die Tiere waren alle ziemlich gleich groß und wogen zwischen 20 und 30 Gramm.

1. Methylviolett.

Ein mittelgroßer Frosch erhält von 2%, Lösung 2 Teilstriche einer Pravaz’schen Spritze, also 0,04 der Substanz in konzentrierter Lösung. Zeit der Injektion :

9:45 Uhr. — Tieranfangs noch sehr munter.

10:25 Uhr: Frosch erträgt Rückenlage.

10:30 Uhr: Hintere Extremitäten völlig gelähmt; Frosch kann nicht mehr springen.

10:35 Uhr: Vordere Extremitäten ebenfalls gänzlich gelähmt; gegen jeden Reiz unempfindlich; von Zeit zu Zeit gehen Zuckungen durch den ganzen Körper.

10:40 Uhr: Rückenhaut, Kopfhaut, Mundhöhle, sämtliche Extremitäten schön violett gefärbt, Bauchhaut frei. Auf der Bauchseite nur der von einer vorderen Extremität zur anderen ziehende Muskel hellviolett gefärbt.

Da das Tier keinerlei Lebenszeichen von sich gibt, wird es getötet.

Section: Rücken-, Bauchmuskulatur, Kopf, Mundhöhle violett gefärbt; Extremitätenmuskulatur frei von Farbe; Peritoneum violett; Herz kontrahiert sich noch, aber äußerst langsam; Blut dunkelbraunrot; Muskulatur violett; Lungen violett; Bauchorgane und Zentralnervensystem normal.

Dieser Versuch wurde an einem gleich großen Tiere mit der gleichen Menge wiederholt, und zeigte im Wesentlichen dieselben Erscheinungen: Allmählige Lähmung, ataktische Erscheinungen, kürzer werden der Sprünge, Gefühllosigkeit. Nach 40 Minuten ist vollständige Lähmung eingetreten, und nach 3 Stunden unter allmähliger langsamer Abnahme der Atmungsfrequenz erfolgt der Tod. Sektion ergibt: Mit Ausnahme der Zunge und der Extremitäten totale Violettfärbung der ganzen Haut und Muskulatur: — Violettfärbung sämtlicher innerer Organe, auch der Hoden. — Zentralnervensystem ganz schwach violett.

Da diese bisher verwandten Mengen so ungemein giftig gewirkt hatten, erhielt das nächste Tier nur 0,0004 in Lösung (0,2 0 Lösung); das Resultat war jedoch ganz das gleiche wıe beim vorigen Versuch. Nach 3 Stunden war der Frosch, nachdem er alle angegebenen Erscheinungen durchgemacht hatte, tot.

Sektion ergab das gleiche Resultat wie beim ersten Frosch, außerdem noch eine schwache Violettfärbung des Zentralnervensystems an der Oberfläche.

Anmerkung:

“Pyoktanin (Methylviolett) ist chemisch eng mit Gentianaviolett verwandt. Gegen das über 100 Jahre alte Antiseptikum bestehen u.E. ähnliche Bedenken wie bei Gentianaviolett. Methylviolett-Lösung ist inzwischen wegen potentieller Risiken aus dem Neuen Rezeptformularium (NRF) ersatzlos gestrichen.”4

2. Malachitgrün

Ein mittelgroßer Frosch erhält 0,008 in Lösung (4%, Lösung) injiziert, also 2 Teilstriche der Pravaz’schen Spritze. Das Tier ist nach wenigen Minuten total gelähmt, reagiert auf keinen Reiz und ist nach 10 Minuten tot.

Sektion: Haut- und Muskulatur von Kopf, Rücken und Extremitäten, ebenso stellenweise Bauchhaut intensiv grün gefärbt, Von den inneren Organen nur Lungen grünlich gefärbt. Zentralnervensystem zeigt einen undeutlichen grünen Anflug. Wegen des so sehr rasch erfolgten Todes des sehr mageren Tieres wurde der Versuch mit der gleichen Menge mit einem kräftigeren wiederholt.

9:00 Uhr: Sofort nach der Injektion kann der Frosch nicht mehr hüpfen, sondern kriecht nur, die hinteren Extremitäten nachschleppend; Bauchlage gewinnt er noch aus Rückenlage;

9:10 Uhr: Tier springt wieder munter umher; auf Nadelstiche keine Reaktion;

9:20 Uhr: Maul wird weit aufgerissen;

9:25 Uhr: Maul immer noch offen, wird durch Zusammendrücken geschlossen; Rückenlage wird vertragen; Extremitäten bleiben meistens liegen, wie sie vom Untersuchenden gelegt werden;

9:30 Uhr: Maul wieder offen;

9:35 Uhr: Vollständige Lähmung;

9:40 Uhr: Tod.

Sektion: Haut und Muskulatur des ganzen Körpers mit Ausnahme der Unterschenkel intensiv grün; Lungen grünlichgrau; Herz: Blut schmutzigrot, Muskulatur grün; Leber: schwarz; Galle: dunkelgrün; alles übrige normal.

Ein drittes Tier erhält nur 0,0004 Substanz in Lösung (0,2%,). Das Tier bleibt die ersten zehn Minuten normal, verhält sich aber von da im Großen und Ganzen wie das vorige und ist nach 50 Minuten tot.

Sektion: Mit Ausnahme einer nicht so ausgebreiteten Grünfärbung der Haut und Muskulatur wie beim letzten Tiere.

Anmerkung:

“In der Tiermedizin zur Behandlung von Infektionskrankheiten von Fischen mit Pilzen, Bakterien, Würmern und Einzellern, z.B. bei der Ichthyophthiriose (Weisspünktchenkrankheit)

[…]

Malachitgrün ist in der Aquakultur umstritten, weil der farblose Metabolit Leukomalachitgrün lange im Fettgewebe der Fische nachweisbar bleibt und vermutlich krebserregend ist. Deshalb ist die Verwendung in vielen Ländern verboten. Zudem kann Malachitgrün toxische Effekte auf die Fische ausüben.”5

3. Rose Bengale

Kleiner, sehr magerer Frosch erhält 0,02 Rose Bengale in Lösung (10 %).

Sofort vollständige Lähmung.

Nach wenigen Minuten tot.

Sektion: Rosafärbung von Rückenhaut und Muskulatur, Mundhöhle, Peritoneum und Lungen; Herz-Muskulatur und Blut dunkelrot; Leber fast schwarz; alles übrige normal.

Der Versuch wird mit einem kräftigen, mittelgroßen Tier mit der gleichen Menge wiederholt.

Erst nach 5 Stunden zeigen sich Veränderungen im Wesen des Tieres; Rückenlage wird ertragen; abgezogene Extremitäten nur zögernd angezogen; ganzer Körper rosa gefärbt. Nach 5 1/2 Stunden: Tier wieder munter; Fluchtversuche; Rückenlage nur manchmal ertragen.

Nach 6 Stunden: vollständig munter mit völlig wiedergekehrter Reaktion auf Nadelstiche.

Am nächsten Tag: Tier sehr munter.

Nach 30 Stunden immer noch munter; Fluchtversuche; Extremitäten werden rasch angezogen; Rückenlage ertragen; starke Aufblähung des Leibes.

In der Nacht nach circa 36—40 Stunden tot; Extremitäten weit abgestreckt.

Sektion: Das ganze Tier bis aufs Knochenmark stark rosa gefärbt, ebenso alle inneren Organe mit Ausnahme der Eierstöcke; im Magen rosa gefärbter Schleim, Gehirn sehr gering äußerlich rosa gefärbt.

Rückenmark normal.

Ein drittes mıt der gleichen Menge eingespritztes Tier verhält sich im Ganzen völlig gleich; Tod tritt zur gleichen Zeit ein. Sektion: wıe beim vorhergehenden.

Anmerkung:

“Bengalrosa ist ursprünglich ein Farbstoff, den Augenärzte in Augentropfen verwenden, um geschädigte Binde- oder Hornhautzellen sichtbar zu machen. Auch die Exkretionsleistung der Leber lässt sich mit seiner Hilfe quantifizieren. Der Grund, warum Merrick Ross, Houston/USA, über den Farbstoff sprach, hat mit den ursprünglichen Einsatzgebieten von Bengalrosa wenig zu tun. Mit isotonischem Kochsalz zu einer 10%igen Lösung verdünnt und in PV-10 umbenannt, soll das zur Klasse der niedermolekularen Verbindungen zählende Bengalrosa helfen, Melanome in den Stadien III und IV intraläsional zu behandeln. Dabei wirkt PV-10 nicht nur in den Läsionen, in die es injiziert wird, lokal ablativ, sondern induziert auch systemische Effekte.”6

4. Trimethylrosanilin (= Kristallviolett)

Mittelgroßer Frosch erhält 2 Teilstriche der Pravazspritze von 0,2 % Lösung, also 0,0004 Substanz in Lösung um 10 Uhr.

10:10 Uhr: Vollständige Lähmung und Gefühllosigkeit; Rückenlage ertragen; Athmung nicht bemerkbar.

10:25 Uhr Frosch reagiert auf Nadelstiche hie und da mit Zuckungen; Rückenhaut nur gering, Bauchhaut violett gefärbt.

10:30 Uhr: Kein Lebenszeichen mehr.

Sektion: Rücken- und Bauchhaut und Muskulatur schwach violett; Peritoneum violett; Lungen violett; Herz: dunkelrot violett; Bauchorgane normal, ebenso Zentralnervensystem.

Der Versuch wird an einem kräftigeren Tiere mit der gleichen Menge wiederholt. Das Tier bietet bis zu seinem nach 6 Stunden erfolgten Tod im Großen und Ganzen das gleiche Bild wie die bisherigen Versuchstiere: Lähmung, Ertragen der Rückenlage, Sensibilitätsstörungen, allmählige Färbung etc. S

ektion: Kopf, Rücken, Bauchhaut, Muskulatur dunkelviolett gefärbt, ebenso Mundhöhle mit Ausnahme der Zunge; Peritoneum violett; Lungen violett; Herz, Muskulatur und Blut dunkelrot.

Mikroskopische Untersuchung des Blutes ergibt keine Veränderung. Leber schwarzbraun; Galle dunkelgrün; Magen-Darmkanal violett; im Magen violett gefärbter Schleim; Hoden normal, ebenso Zentralnervensystem.

Anmerkung:

“Methylrosaniliniumchlorid wirkt bakteriostatisch und hemmt darüber hinaus das Wachstum von Hefen und Dermatophyten. Der intensiv violette Farbstoff ist insbesondere gegen grampositive Bakterien wirksam. Die antimikrobielle Wirkung steigt mit dem pH-Wert. Wässrige Methylrosaniliniumchlorid-Lösungen in den Konzentrationen 0,1, 0,3 und 0,5 Prozent werden bei Infektionen der Haut und Mundschleimhaut angewendet. Die NRF-Rezeptur wird beispielsweise bei atopischem Ekzem, Mischinfektionen im intertriginösen Bereich (Körperfalten, beispielsweise Achseln, unter der weiblichen Brustfalte) und oberflächlichen Candidosen verordnet. Bei Windeldermatitis findet nur die 0,1-prozentige Lösung Anwendung. Der Wirkstoff wirkt austrocknend und begünstigt somit die Schorfbildung. Gleichzeitig wirkt der Farbstoff juckreizlindernd. […] Methylrosaniliniumchlorid hemmt wie alle kationischen Triarylmethanfarbstoffe die Wundheilung. Die Stärke des Effektes ist konzentrationsabhängig. Für den vorliegenden Wirkstoff ist dies bereits bei Konzentrationen unter 0,5 %Prozent zu beobachten. Werden die Konzentrationen noch höher gewählt, so kann es zu Nekrosen der Haut und Schleimhaut kommen. Verordnungen mit Lösungen über 0,5 Prozent dürfen demnach nicht hergestellt werden. Vor allem bei Kleinkindern haben bereits 0,3-prozentige Lösungen tiefe Erosionen und Nekrosen hervorgerufen.”7

5. Phenylblau

Mittelgroßer Frosch erhält von 4%, Lösung 2 Teilstriche, also 0,008 Substanz in Lösung. Zeit der Injektion: 9 Uhr. Tier nach derselben sehr munter.

9:15 Uhr: Blaufärbung an Rücken, Bauch und Ansatz der hinteren Extremitäten.

9:30 Uhr: Rückenlage ertragen; stärkere Färbung; energisches Reagieren auf Reize durch Fluchtversuche.

Bis 1 Uhr: Statusi dem. Von da an allmähliger Verlust der Munterkeit. Kürzere Sprünge; auf Reize keine Fluchtversuche; Extremitäten werden noch angezogen.

1. 30 Uhr: Vollständige Blaufärbung von Rücken und Bauch.

2 Uhr: Tier bleibt völlig apathisch auf der Stelle liegen, wo es hingelegt wird. Extremitäten auf Reize nur ganz zögernd angezogen.

2:15 Uhr: Tier reagiert auf keinen Reiz mehr.

2:30 Uhr: Tod.

Sektion: Kopf, Rücken, Bauchhaut und Muskulatur, Mundhöhle mit Ausnahme der Zunge blau, ebenso Peritoneum; Lungen bläulich; Herz, Muskulatur dunkelblau, Blut dunkelrot; Leber fast schwarz, Galle blaugrün; Magen-Darmkanal normal, ebenso Zentralnervensystem.

6. Methylenblau

Mittelgroßes Tier erhält von 3%, Lösung einen Teilstrich der Pravaz’schen Spritze, also 0,003 der Substanz in Lösung um 9 Uhr.

9:05 Uhr: Tier noch sehr munter; Blaufärbung der ganzen Rückenhaut.

9:20 Uhr: Deutliche Erscheinungen von Parese; Rückenlage ertragen; Springen noch möglich; auf Reize wird nicht mehr reagiert; hintere Extremitäten bleiben in der ihnen gegebenen Lage liegen, ohne angezogen zu werden.

9:25 Uhr: Vordere Extremitäten auch paretisch.

9:28 Uhr: L. Vordere Extremität gänzlich gelähmt. R. Vordere wird auf Reize nur noch zögernd angezogen. Auf Nadelstiche keine Reaktion mehr.

9:30 Uhr: Vollständige Lähmung der rechten vorderen Extremität. Vollständige Blaufärbung des Tieres mit Ausnahme der Unterschenkel der hinteren Extremitäten. 9:35 Uhr: Tod.

Sektion: Blaufärbung der ganzen Haut und Muskulatur; innere Organe durchweg normal.

Für den Frosch hatten sich, den vorangehenden Versuchen gemäß, sämtliche Farbstoffe mehr oder weniger giftig erwiesen, immer aber, wenn auch nach längerer Zeit, tödlich selbst in geringen Dosen. Es galt nun, noch die Wirkungen der untersuchten Substanzen an Warmblütern zu studieren, und eventuell die Dosis, die noch ohne Schaden ertragen werden konnte, herauszufinden.

Zu diesem Zwecke wurden Injektionsversuche an Kaninchen angestellt, und zwar wurden dieselben stets in die Rückenhaut gemacht; um die für alle Substanzen gleiche Dosis zu bestimmen, wurde von der 4%, Malachitgrünlösung ausgegangen, und von dieser auf 1 Kilogramm 0,1 der Substanz in Lösung injiziert; darnach stellte sich für Methylviolett die Dosis pro Kilogramm auf 0,05, für Rose Bengale auf 0,25, für Trimethylrosanilin auf 0,02, für Phenylblau auf 0,1 und für Methylenblau auf 0,075 pro Kilogramm. Diese Dosen waren viel geringer als die den Fröschen einverleibten; die den Fröschen einverleibte Dosis von Malachitgrün würde z. B. aufs Kaninchen ausgerechnet, 0,4 pro Kilogramm ergeben haben.

Es wurde nun zunächst ein hellbraunes Kaninchen von 1570 Gr. Gewicht mit gesättigter Methylviolettlösung injiziert, und zwar erhielt dasselbe 3%, Pravaz’sche Spritzen voll, also 0,078 Substanz ın Lösung. Bis zum 15, Tage wurde an dem Tiere keinerlei Abnormität entdeckt, und insbesondere keine Lähmungserscheinungen, noch Störungen in Nahrungsaufnahme und -Abgabe. Am 15, Tage konnte eine geringe Gewichtsabnahme auf 1400 Gramm konstatiert werden; an diesem Tage bemerkte ich auch erst auf dem Rücken an der Injektionsstelle eine etwa talergroße, trockene Hautgangrän, von der aus sich ein etwa 8 Centimeter langer und 0,5 cm breiter Gangränstreifen nach dem Bauch zuzog, entsprechend dem Verlauf, den die Injektionsflüssigkeit unter der Haut genommen hatte; auf dem Bauch, jedoch durch: eine schmale Brücke von dem Ende des Streifens getrennt, befand sich eine etwa handtellergroße, ebenfalls durch Gangrän in Zerstörung begriffene Hautstelle. Die Gangrän schien dem Tiere nicht die geringsten Beschwerden zu machen; es war immer ganz munter und fraß auch alles, was ihm vorgelegt wurde. Diese Umstände waren auch der Grund, dass ich diese Stellen nur ganz zufällig bemerkte. Am 17. Tage war die Gangrän vollständig demarkiert und ganz hart und schwarz geworden, und begann sich von da an allmählig abzustoßen. Am 22, Tage war das Körpergewicht auf 1320 Gramm herabgesunken; das übrige Verhalten des Tieres blieb durchaus normal. Bis zum 50, Tage hatte sich das Gewicht wieder auf 1400 Gramm gehoben; die gangränöse Haut hat sich nahezu abgestoßen. Am 31. Tage ist dies gänzlich der Fall; der Grund der Hautdefekte auf Rücken und Bauch ist schön violett gefärbt, und die Stellen beginnen mit narbiger Einziehung zu heilen, so dass das Tier, dessen Gewicht am 32. Tage 1470 Gramm ist, von der Injektion mit Methylviolett nichts als die zwei Narben davontragen wird.

Ein zweiter Versuch mit Methylviolett wurde nun in der Weise gemacht, dass nur die Hälfte der erst injizierten Menge, also nur 0,025 auf das Kilogramm genommen wurden. Ein großes schwarzes Kaninchen von 2090 Gramm Gewicht erhielt demnach 0,05175 Substanz in Lösung auf 2,5, Pravazspritzen verteilt. Auch dieses Tier bot keinerlei abnorme Erscheinungen mit Ausnahme wieder geringer lokaler Affektionen. Am 20. Tage wurde auf dem Bauche eine kaum pfenniggroße trockene Hautgangrän, ebenso an den beiden Seiten je eine etwa gleich große Stelle bemerkt. Die Gangrän hat sich nach circa 23 Tagen demarkiert und nach 27 Tagen fast völlig abgestoßen. Gewichtsabnahme in nennenswerter Weise war während der ganzen Zeit nicht zu bemerken. Methylviolett scheint also auf den Warmblüter in geringen Dosen lediglich eine lokale Wirkung auszuüben, sicherlich aber keine dauernd schädliche toxische.

Beim 2. Versuche mit Malachitgrün erhält ein 1370 Gramm schweres Tier von 4%, Lösung 0,137 Substanz in Lösung, auf 3,5 Spritzen verteilt.

Bis zum 3. Tage zeigt das Tier keinerlei Abnormität.

Vom 3. Tage an nimmt es keine Nahrung mehr zu sich und zeigt eine geringe Parese sämtlicher Extremitäten. Am 4. Tage ist die Parese, namentlich der hinteren, stärker geworden. Ins Freie gebracht, frisst das Tier das frische Gras ganz munter, während es im Käfig nichts annimmt.

Am 7. Tage ist die Parese der hinteren Extremitäten sehr stark geworden; die der vorderen ist immer noch schwach; legt man das Tier auf eine Seite, so ist es nicht im Stande, sich selbst aufzurichten, sondern strampelt nur ängstlich mit den Beinen. Harn hellgrün gefärbt.

8, Tag. Lähmung vollständig; das Tier liegt auf der Seite und hat von Zeit zu Zeit starke Zuckungen in den Extremitäten; es nimmt keinerlei Nahrung mehr zu sich. Abmagerung; Harn hellgrün.

Am 9. Tage Vormittags tritt nach vorausgegangener starker Dyspnoe und starken Muskelzuckungen der Tod ein.

Sektion: Haut durchweg grün gefärbt, besonders an den Seiten. Muskulatur blassbraunrötlich; Faszien nicht gefärbt. Herz: Muskulatur sehr schlaff; Lungen, Leber, Gallenblase normal. Magen sehr stark angefüllt mit grünem Speisebrei; Schleimhaut normal; Darm durchweg kontrahiert und leer; Nieren normal. Blase sehr stark durch hellgrünen Harn ausgedehnt; Schleimhaut normal. Zentralnervensystem nichts Abnormes.

Es wurde nun dieses Experiment nur mit der Hälfte der vorhin injizierten Quantität wiederholt, Ein braunes Kaninchen, 1655 Gramm schwer, erhält 0,0878 Substanz in Lösung auf 2,8 Spritzen verteilt von der 4% gesättigten Lösung.

Die ersten 10 Tage verhält sich das Tier durchaus normal.

Am 11. Tage kann sich das Tier nur durch langsames Kriechen weiter bewegen, wegen einer geringen Parese der hinteren Extremitäten. Nahrungsaufnahme und -Abgabe normal. Nach einigen Tagen ist die Parese wieder verschwunden.

Am 23. Tag bemerkte ich an dem bisher ganz munteren Tier, dass es ganz stumpfsinnig im Käfig saß; am ersten Hoden war eine beginnende Hautgangrän zu beobachten, sowie zwischen beiden Hoden und dem Penis eine Anzahl sich lebhaft bewegender 11,5 cm langer weißer Würmer, Gewicht des Tieres war auf 1410 Gramm herabgesunken. Da das Tier bei längerer Beobachtung sehr zu leiden schien, so wurde es getötet.

Sektion: Muskulatur nur im Bereiche der Injektionsstelle grün gefärbt. In der Brusthöhle beiderseitig ein sehr starkes reineitriges, pleuritisches Exsudat. Beide Lungen: Unterlappen pneumonisch infiltriert, dunkelrot, luftleer; die übrigen Lappen normal; Herz normal. Magen-Darmkanal normal; sehr stark gefüllt; Leber ziemlich blutreich; Gallenblase stark kontrahiert; Nieren sehr anämisch, Rindensubstanz gelblich, Pyramiden schwach rosa gefärbt. Rechter Hoden: Haut äußerlich gangränös, am linken Hoden Beginn. Hoden selbst beide normal. Zentralnervensystem normal.

Die Pneumonie und Pleuritis, sowie die Hautgangrän am Hoden sind sicherlich nicht auf eine Wirkung des Malachitgrün zurückzuführen, welches bei diesem Tiere in kleiner Dosis in der langen Zeit von 23 Tagen wahrscheinlich gar keine Erscheinung gemacht hatte. In der stärkeren Dosis hat es sicher stark giftige Wirkung.

Ein drittes Tier, das wieder mit der starken Dosis, 0,1 aufs Kilogramm, eingespritzt wurde, zeigte bis jetzt, bis zum 4, Tage, keinerlei Abnormität.

3. Versuche mit 0,2% Trimethylrosanilinlösung.

Ein 1400 Gramm schweres Kaninchen von weißer Farbe erhält 0,028 Substanz in Lösung auf 14 Spritzen verteilt. Das Tier zuckt im Gegensatz zu den andern Versuchstieren hastig bei den Injektionen zusammen und schreit mitunter laut auf. Im Käfig zuckt es bei jeder leisen Berührung stark zusammen.

2. Tag. Das Tier hat seit der Injektion Nichts gefressen; geringe paretische Erscheinungen an den Extremitäten. Wirft man das Tier um, so ist es nur nach ziemlicher Anstrengung wieder im Stande, sich aufzurichten.

6. Tag. Status idem. Harn leicht hellviolett gefärbt. Fast keine Nahrungsaufnahme.

9. Tag. Seit zwei Tagen sichtliche Abmagerung. Parese, namentlich hinten, hat an Stärke zugenommen.

10. Tag. Vollständige Paralyse; das Tier liegt auf der Seite und macht von Zeit zu Zeit vergebliche Anstrengungen, sich aufzurichten. Kolossale Abmagerung. Starke Dispnoe; 40 Atemzüge in der Minute; nach 1 Stunde nur noch 30.

Das Tier wird, da es sich doch nicht mehr erholen kann, getötet.

Sektion: Muskeln und Haut durchweg normal gefärbt. Im Magen eine geringe Menge Speisebrei; auf der Schleimhaut einige über riesengroße Blutextravasate; Blase leer. Alle übrigen Organe vollständig normal. Es wird nun ein braunes, 1290 Gramm schweres Tier nur mit der Hälfte injiziert; also erhält es 0,0129 Substanz auf 6 9/20 Spritzen verteilt.

3. Tag. Geringe Parese der hinteren Extremitäten; welche am 11. Tage rechts hinten und links hinten am 12. Tage verschwunden ist.

Am 16, Tage an beiden Einspritzungsstellen eine geringe, etwa Pfennigstückgroße, trockene Hautgangrän bemerkbar, die weiter keine Erscheinung macht. Nahrungsufnahme und -Abgabe stets normal, Da das Tier vollständig gesund ist, wird es am 20. Tage zu anderen Versuchen verwandt.

4. Ein weisses Kaninchen 1770 Gramm schwer, mit 0,135 Methylenblau injiciert, auf 4,5 Spritzen verteilt, bleibt vollständig gesund, ebenso 5. ein 1420 Gramm schweres Tier mit 0,142 Phenylblau (auf 3,5, Spritzen verteilt) in Lösung. Beim ersteren lediglich Blaufärbung der Rücken- und Bauchhaut an manchen Stellen; bei letzterem trat am 3. Tage grünlicher Harn auf; auch ist eine geringe Abmagerung zu konstatieren,

6. Ein hellbraunes, 1530 Gramm schweres Kaninchen erhielt 3 8/10 Spritzen von gesättigter Rose Bengalelösung, also 0,38 Substanz.

Am 2. Tage trat geringe Parese der hinteren Extremitäten auf, war jedoch am 8. Tage wieder völlig verschwunden. In den ersten Tagen war eine mäßige Abmagerung nachzuweisen, die jedoch bald wieder fast behoben wurde. Der sonstige Zustand vollständig normal. Aus den drei letzten Versuchen geht mit Sicherheit hervor, dass Methylenblau, Phenylblau und Rose Bengale gar keinen oder wenigstens keinen nennenswerten und nur vorübergehenden toxischen Einfluss in mäßigen Dosen auszuüben im Stande sind. Gegen den Kaltblüter haben sich alle 6 Farben ausnahmslos stark giftig erwiesen.

Zusammenfassung

Das Endergebnis der in vorliegender Arbeit beschriebenen Versuche gestaltet sich nun wie folgt.

1. Das zu den Rosanilinen gehörige Methylviolett hat sich sowohl in gesättigten Lösungen als auch in schwächeren und sogar in 0,07% Lösung bei Einwirkung von 24 Stunden bis zu einer Minute in sämtlichen Versuchen vollständig aufhebend für die Entwicklung von pathogenen Pilzen, speziell des Staphylococcus pyogenes aureus und des Bacillus Anthracis erwiesen; seine Giftigkeit gegen den Organismus des Warmblüters beschränkt sich in schwachen Dosen und zwar — 0,05 aufs Kilogramm (Kaninchen) auf rein örtliche Affektionen.

2. Das den Rosanilinen verwandte Malachitgrün bewies ebenso in sämtlichen Versuchen, sowohl in gesättigten Lösungen bei kürzester Einwirkung von 1 Minute, als auch in schwachen Lösungen von 0,133 Prozentgehalt bei Einwirkung von 24 Stunden, dass es vollständig aufhebend auf die Entwicklung des Pyogenes aureus und des Milzbrandes wirkt. Seine Giftigkeit gegen Warmblüter scheint noch in Dosen von 0,1 aufs Kilogramm eine starke zu sein; jedoch in der Dosis von 0,05 ist dasselbe schon nicht mehr als giftig zu betrachten.

3. Der Gruppe der Rosaniline gehört ferner an das Primethylrosanilin oder Hofmann’s Violett. Dasselbe erwies sich in konzentrierten Lösungen gegen Pyogenes aureus bei kurzer Einwirkung von einer Minute aufhebend, bei schwächeren Lösungen dagegen nur stark verzögernd. Gegen Milzbrand wirkt es in konzentrierten Lösungen lediglich verzögernd. Seine Giftigkeit ist in der Dosis von 0,02 aufs Kilogramm für den Warmblüter eine große; in der Dosis von 0,01 hat es lediglich eine örtliche Giftwirkung zur Folge.

4. Zu den Rosanilinen gehört ferner noch das Phenylblau oder Triphenylrosanilin. In gesättigten Lösungen wirkt es bei ganz kurzer Einwirkung von nur einer Minute sicher aufhebend gegen den Pyogenes aureus und gegen den Milzbrand; in schwächeren Lösungen wirkt es lediglich sehr stark verzögernd. In der Dosis von 0,1 aufs Kilogramm besitzt es für den Warmblüter keine Giftigkeit.

5. Methylenblau wirkt selbst in der schwachen 0,1% Lösung vollständig aufhebend für den Staphylococcus pyogenes aureus; gegen Milzbrand wirkt es in gesättigten Lösungen bei ganz kurzer Zeitdauer nur verzögernd. Giftigen Enfluss auf den Warmblüter besitzt das Präparat in der Dosis von 0,075 aufs Kilogramm nicht.

6. Das zu den Fluoresceinen gehörige Rose Bengale wirkt bei kürzester Einwirkung in starken Lösungen sicher aufhebend gegen den Staphylococcus pyogenes aureus,in der schwachen 0,33% Lösung lediglich verzögernd; gegen Milzbrand scheint die Substanz gar keine Wirkung in konzentrierten Lösungen bei kurzer Einwirkung zu haben, höchstens eine hemmende bei längerer. Dem Warmblüter gegenüber zeigt Rose Bengale keine nennenswerten toxischen Eigenschaften.

Aus dieser Zusammenfassung geht hervor, dass Methylviolett und Malachitgrün hervorragende antibakterielle Eigenschaften besitzen, indem sie sich namentlich durch eine ungemein rasche Einwirkung auf pathogene Pilze auszeichnen; gerade wegen dieser Eigenschaft glaube ich, dass diese beiden Substanzen entschiedene Beachtung verdienen, um so mehr, da sie in ganz kleinen Dosen kaum mehr giftig wirken. Einer praktischen Anwendung werden sich jedoch durch die hervorragende Färbekraft der Substanzen vielleicht Schwierigkeiten entgegenstellen. Nächsten in der Wirkung kommt dann Phenylblau, das sich durch geringe Giftigkeit auszeichnet; auch dieses Präparat besitzt ausgezeichnete antibakterielle Eigenschaften. Trimethylrosanilin und Methylenblau fallen in ihrer Wirkung schon bedeutend gegen die vorgenannten Stoffe ab durch ihre geringe Wirksamkeit gegen Milzbrand; ersteres ist ein ziemlich starkes Gift, letzteres absolut ungiftig in den angegebenen Dosen. Rose Bengale hat von allen 6 genau untersuchten Stoffen die geringsten antibakteriellen Eigenschaften; gegen den Warmblüter verrät es in Dosen von 0,25 aufs Kilogramm keine Giftigkeit. Von den 3 letzt besprochenen dürfte vielleicht nur noch Methylenblau eine weitere Beachtung finden. Der Umstand, dass bei Kaltblütern alle 6 Substanzen ohne Ausnahme so sehr stark giftig wirkten, dürfte, da hierbei sehr große Dosen genommen wurden im Verhältnis zu den Warmblütern, wegen der bei diesen gefundenen Resultate weiter keine Rücksicht erfahren.

Bei der Gram-Färbung werden gram-positive Bakterien mit einem basischen Anilinfarbstoff und noch anderen Bestandteilen, blau gefärbt. Gram-positive Bakterien bleiben blau, weil sie ein dickere Hülle haben und den Farbstoff nicht mehr raus bekommen. Das kann sie töten. Gram-negative Bakterien haben eine dünne Hülle und werden Anilinfarbstoffe wieder los.

Dass Methylenblau gram-positive Bakterien töten kann ist somit offensichtlich.

Obwohl Salmonella Typhi gram-negativ ist, schein Methylenblau es abzutöten.

Methylenblau wurde auch bei (anderen?) Durchfallerkrankungen eingesetzt. Wie genau die Differenzierungen der Ursachen des (unstillbaren) bakteriell verursachten Durchfalls war, sei einmal dahingestellt.

Die damals verwendeten Dosierungen sind jedoch recht hoch im Vergleich mit den heute üblichen Dosierungen.

1Wiener Medizinische Wochenschrift Nr. 27, 1917, S. 193

“A. Galambos: Neue Richtlinien in der Heilung des Typhus und des Paratyphus A und B.
In zirka 400 Fällen verwendete G. die Vakzine von Besredka, in der Regel intravenös und nur in mittelschweren Fällen. Gute Wirkung erzielte er auch mit der Kolivakzine. Methylenblau gab ihm in schweren und in schwersten Fällen die besten Resultate.“

Deutsche Medizinische Wochenschrift 9. November 1916 S. 1395

“A. Galambos, Behandlung der Typhus- und Paratyphus (A und B) Erkrankungen mit Methylenblau. Ther. d. Gegenw. Nr. 10. Man gibt pro dosi 20 cg, pro die 1,2 g vierstündlich, täglich sechsmal in Oblaten bzw. Gelatinekapseln innerlich. Meist genügen vier bis acht Tage; im einzelnen sind die Modifikationen zu beachten, die der Autor, je nach der Eigenart des Falles, vorschreibt. Allerdings kommen dabei kritische oder prompte Heilungen nicht so oft vor wie nach Besredka- oder Koli-Injektionen, andererseits ist die Methylenblau-Darreichung gefahrlos und auch in schwersten Fällen nicht kontraindiziert.”

Therapie der Gegenwart Nr. 10 1916 S. 365-369

“Mitteilung aus einem k. u. k. Mob.-Res.-Spital.

Über die Behandlung' der Typhus- und Paratyphus- (A und B) Erkrankungen mit Methylenblau.

Von Dr. A. Galambos, k. u. k. Reg.-Arzt i. d. Res.

Vorläufige Mitteilung.

Bei der Behandlung des Typhus und Paratyphus A und B kommt — nach meiner Erfahrung — dem Methylenblau eine wichtige Rolle zu. Als Ausgangspunkt zu meinen therapeutischen Versuchen diente die in der Behandlung der Malaria beobachtete prompte Wirkung des Methylenblaus. Obzwar nach den neuesten Erfahrungen in der Behandlung des Typhus und Paratyphus A und B der Typhusvaccine (Galambos: Über die Behandlung des Typhus und Paratyphus A und B mit der Besredkaschen Vaccine, Zschr. f. klin. M. 1916, Bd. 83), wie auch anderen Verfahren (Galambos: Die Behandlung des Typhus und Paratyphus mit Albumose, Heterovaccine, NaCI-Lösungen usw., W. kl. W. 1916) eine ganz besondere Rolle zukommt, schien doch das Forschen nach anderen Mitteln a priori

nicht überflüssig. Der Grund hierfür ist: dass

1. bei all diesen Verfahren das Mittel intravenös verabfolgt wird; aber nicht einmal die intravenöse Anwendung, sondern vielmehr die Indikation der Anwendung und die der Wiederholungen der Injektionen usw. einen Spezialarzt erfordert, der ganz besonders im Gebiete der Vaccinetherapie Erfahrung, Gewandtheit besitzt. Diese Verfahren können nur in der Hand einzelner spezialistisch gebildeter Fachärzte, einzelner Kliniker, nie aber in der Hand des praktischen Arztes segenhaft wirken.

2. Alle diese Verfahren bedeuten selbst in der Hand des geübten Arztes eine gewisse Gefahr. Diese Verfahren, i. e. die intravenösen Vaccine- und Hetero-vaccine-Injektionen besitzen alle diese gemeinsame Eigentümlichkeit, dass sie eine gewaltige Reaktion auslösen (Schüttelfrost, Hyperpyrexie, kritischer Temperaturfall), große Anforderungen an das Herz stellen, ihre Anwendung im Falle gewisser Komplikationen (Pneum. croup., Myokarditis) kontraindiziert ist, in den schwersten Fällen, wo wir eben hilflos dastehen, kaum anwendbar sind. In zirka 1-1,5% der Fälle tritt nach Anwendung derselben Kollaps auf, der gewöhnlich zum Tode führt. Sogar in Fällen der Anwendung der Typhusvaccine treten zirka 1-2% der Fälle toxische Darmblutungen, Verblutungen auf. Je wirksamer die Mittel im allgemeinen sind, desto stärker sind die Reaktionen, und um so größer die Gefahren.

3. Die Anwendung dieser Verfahren wird auch dadurch erschwert, dass die Vaccine keine chemischen, sondern sero-bakteriologische Präparate sind, und infolgedessen in der Wirksamkeit desselben Mittels große Schwankungen vorkommen, höchstwahrscheinlich auf Grund der verschiedenen Virulenz, Toxizität der zur Herstellung verwendeten Bakterien. So zum Beispiel: früher verabfolgte ich von Colivaccine 25-50-100 Millionen Keime pro dosi intravenös —mit mäßigen Reaktionen. Bei den neuerlich erhaltenen Präparaten lösen gewöhnlich 10-12 Millionen Keime schon gewaltige Reaktionen aus, sodass als Maximaldose 50, ja sogar oft 25 Millionen Keime angenommen werden müssen. Die Wirksamkeit ist also im Minimum die vierfache des vorherigen. — Neuerlich injiziere ich von der Besredkavaccine (Typhus) intravenös 1/4 ccm als Anfangsdosis und wiederhole die Injektionen höchstens zweimal mit 1/2 ccm, um toxische Blutungen, Kollapszustände zu vermeiden.- Seit dieser Zeit — verwendet in zirka 50 Fällen — kamen unangenehme Nebenwirkungen nicht vor. — Die Wirksamkeit der Albumose ist auch — sicher nach der verschiedenen chemischen Zusammensetzung derselben — (hergestellt aus verschiedenen Eiweißkörpern, enthaltend verschiedene Aminogruppen usw. sehr different. Zuerst hatte ich ein Präparat, welches zirka in 50% kritische Heilung herbeiführte, dann kamen verschiedene Präparate beinahe ohne Wirkung, heute besitze ich auch wieder ein Präparat, welches in über 25% der Fälle prompt heilt. Üble Wirkungen sah ich in über 60 Fällen (über 100 Injektionen) nicht (im Beginne von zersetzter Lösung zweimal Todesfälle). — Die Anwendung der NaCl-Infusionen ist umständlich, ihre Wirkung ist bedeutend geringer.

4. All diese Verfahren führen nur in einem gewissen Prozent (20-35%) zur kritischen Heilung, sogar gute Beeinflussung ist auch nur in zirka 50-75% zu erwarten. In 25-50% bleibt die Wirkung aus. Die Mortalität betrug 7-9%.

Methylenblau wird dagegen per os verabfolgt. Seine Anwendung ist in keinem Falle kontraindiziert, in den schwersten Fällen, sowie auch bei Erkrankungen mit schweren Komplikationen kann es ebenso verabfolgt werden. Reaktionen treten nicht auf, schädliche Wirkungen habe ich überhaupt nicht beobachtet. Das Mittel ist ein chemisches Mittel und infolgedessen seine Zusammensetzung und seine Wirkung immer dieselbe; Schwankungen in der Wirksamkeit kommen nicht vor. Zur Anwendung ist kein Spezialarzt notwendig, der praktische Arzt kann es ebenfalls gut verabfolgen. Ich gab. pro dosi 20 cgr, pro die 1,2 gr (M. B. medicinale, Merck; vierstündlich, täglich sechsmal). Verabreicht soll es in Oblaten, noch besser in Gelatinekapseln werden. Die durchschnittliche Darreichungsdauer beträgt vier bis acht Tage. Wenn inzwischen — am zweiten bis dritten Tage — Entfieberung eintritt, kann die Darreichung eingestellt oder aber noch einen bis zwei Tage weiter fortgesetzt werden. Wenn nach vier bis sechs Tagen sich keine Neigung zum Temperaturfalle zeigt, kann es ausgesetzt werden. Wenn erst nach vier bis fünf Tagen die Temperaturabnahme beginnt, kann noch

zwei bis drei Tage weiter fortgesetzt werden. Nicht selten ereignet sich, dass bis zur Darreichung kaum ein nennenswerter Erfolg oder überhaupt keine Beeinflussung wahrnehmbar ist, gleich nach Aussetzen aber, spätestens ein bis zwei Tage nachher ein auffallendes Sinken der Temperatur, eventuell eine Entfieberung eintritt. Die während der Darreichung des Mittels begonnene Abnahme des Fiebers setzt sich gewöhnlich auch nach Aussetzen desselben bis zur vollständigen Entfieberung fort. Es kommt mitunter — seltener als nach intravenöser Besredka oder Coli-injektionen — vor, dass in ein bis zwei Tagen nach dem Aussetzen des Mittels wieder eine langsame Temperatursteigerung beginnt. Diese neuerliche Temperatursteigerung wird gewöhnlich — wenn sie nach Einschränkung der Diät nicht aufhört — durch neuerlich erfolgte Darreichung des Mittels prompt beeinflusst. Es genügt in diesen Fällen eine nochmalige ein- bis zwei-, seltener drei- bis viertägige Darreichung des Mittels zur vollständigen Entfieberung. Selbstverständlich bleiben Fälle, wo die wiederholte Darreichung doch erfolglos ist. In einem guten Teile der refraktären Fälle konnte ich noch nach Verabfolgung einer intravenösen Besredka-, Coli- oder Albumose- Injektion eine kritische Heilung oder ausgesprochene Beeinflussung erreichen. Die Entfieberung erfolgte mit Ausnahme weniger Fälle, wo sie schon binnen acht bis zwölf Stunden also kritisch auftrat, gewöhnlich lytisch. Die Temperatursenkung war nie von starkem, prefusem Schweißausbruch begleitet, wie es nach Pyrymidonbehandlung oft der Fall ist. Die Beeinflussung des allgemeinen Zustandes war eine gute; Sensoriumstörungen, Benommenheit, Status typhosus, Kopfschmerzen, Appetitlosigkeit usw. besserten sich beinahe immer parallel mit dem Nachlassen des Fiebers. Dass die Zurückbildung des Milztumors, vollständiges Verschwinden der lleocöcalschmerzen usw. die Fieberperiode überdauern konnten, ist selbstredend. Bis jetzt verabfolgte ich dieses Mittel in 120 Fällen, endgültiges Urteil kann ich heute über die ersten 95 Fälle abgeben. Diese Fälle bezogen sich — ausgenommen die leichteren Erkrankungen, deren Zahl während dieser Zeit zirka 50 betrug — auf sämtliche Zugänge unseres Spitals, mit Ausnahme der nicht zahlreichen Fälle im Stad. Decrementi. Es waren der Schwere nach (zirka 50 leichtere Erkrankungen wurden nicht behandelt); 63 mittelschwere (Ty. 2, P. A. 35, P. B. 4, Bakt. neg. 22), 23 schwere (Ty. 5, P. A. 11, P. B. 1, Bakt. neg. 6), 9 sehr schwere (Ty. 2, P. A. 4, P. B.1, Bakt. neg. 2) Fälle behandelt. Die Fälle der mittelschweren, schweren und sehr schweren Erkrankungen wurden ausnahmslos mit Methylenblau behandelt. In diesen sämtlichen Fällen konnte die Diagnose auch im Falle des negativen bakteriologischen Befundes auf Grund der klinischen Erscheinungen (Roseola, Milztumor, Ileocöcalschmerzen, sehr oft trockene, typische Zunge mit Rhagaden, positive Diazoreaktion, Continua, sehr oft Stat. typhosus, Sensoriumstörungen usw.) als sicher angenommen werden. Nachdem die meisten bakteriologisch-positiven Fälle Paratyphus und nicht Typhuserkrankungen waren, bleiben — solange bis die therapeutischen Versuche auch an einer größeren Zahl blutbakteriologisch-positiver Typhuserkrankungen nicht angewendet werden — sämtliche Behauptungen und Folgerungen einstweilen in der ersten Reihe auf Paratyphus A, dann auf Paratyphus B und auf Typhus abdominalis aufrecht. Der Schwere nach war zwischen diesen Erkrankungen kaum ein Unterschied zu verzeichnen. Bakteriologisch-positiv waren auf Typhus abdominalis 9 (ausnahmslos im Blute, 2 auch im Stuhle), auf Paratyphus A 50 (35 im Blute, die übrigen in Roseola, Stuhl oder Urin), auf Paratyphus B 6 (3 im Blute, die übrigen je 1 in Roseola, Stuhl und in der Darmgeschwürswand der Leiche). Bakteriologisch-negativ waren 30 Fälle. In einem bedeutenden Teile dieser bakteriologisch-negativen, oft äußerst schweren Erkrankungen mag der negative Befund im Zusammenhange stehen mit der letzten Typhusschutzimpfung, welche in einem guten Teile dieser Fälle knapp vor der Erkrankung, also in der Inkubationszeit, sogar während der ersten Krankentage verabfolgt wurde. Infolgedessen kann der größte Teil dieser negativen Fälle als Typhus und nicht als Paratyphus angesehen werden. Von den 95 Fällen war die Erkrankung 12mal (13%) kritisch geheilt (binnen höchstens vier Tagen nach Beginn mit dem Mittel, also gewöhnlich noch während der Verabfolgung des Mittels, bei sechs-

maligen vierstündigen Messungen vollständige und endgültige Entfieberung), prompt beeinflusst — wo in fünf bis zehn Tagen nach Beginn, also ein bis drei Tage nach Beendigung der Darreichung die vollständige Entfieberung eintrat oder aus einer sehr schweren Erkrankung eine mittelschwere wurde — war die Erkrankung 25mal (26%). Eine noch sicher nachweisbare, ausgesprochene Wirkung war 13mal (14%) nachweisbar. 45mal (47%) war keine sichere Wirkung beobachtet. Ich bin in der Beurteilung der Wirksamkeit des Mittels streng vorgegangen und habe Fälle mit mäßiger Wirkung oder mit ausgesprochener aber vorübergehender Wirkung oder Fälle, in denen die gute Wirkung nicht mit Sicherheit festgestellt werden konnte, zu den negativen Fällen gerechnet. In einem großen Teile der negativen Fälle (die im Beginne behandelten) wurde die Verabfolgung nur durch zwei bis drei Tage fortgesetzt. Sicher wäre noch in einem guten Teile dieser Fälle durch weitere Fortsetzung mit dem Mittel eine gute Wirkung erzielt worden. Nicht gerechnet diese (25) Fälle, wäre die Zahl der wirkungslos gebliebenen Fälle kaum 20 (30 %). Über die Vergleichsresultate der mit Pyramidon (6 x 10 cgr täglich, vierstündlich) behandelten Fälle berichte ich in der nächsten Arbeit. Hier sei nur kurz erwähnt, dass, wenn auch in den leichteren und mittelschweren Fällen — nicht sehr selten — eine die Krankheitsdauer —anscheinend — verkürzende Wirkung wahrzunehmen war, konnten jedoch bei den schwereren und sehr schweren Erkrankungen ähnliche Wirkungen nicht beobachtet werden. Wichtig und erfreulich ist, dass eine gute Wirkung in den schweren und in den schwersten Fällen wenigstens so oft zu verzeichnen war, als in den mittelschweren Fällen. Ich habe darauf hingewiesen (siehe die zitierten zwei Arbeiten), dass bei der Vaccine-, Heterovaccine-, Albumose-Therapie die schwersten Fälle bedeutend seltener gut reagieren als die mittelschweren, ja sogar eben in den aller schwersten Fällen diese intravenöse Behandlung infolge der schweren Reaktionen, die den intravenösen Injektionen folgen, kontraindiziert ist. Wo man also am meisten angewiesen war, die Kranken aus dem aller schwersten Zustande herauszuhelfen, war man zur Hilflosigkeit verurteilt. Die subkutane Anwendung der Vaccine brachte nur selten zufriedenstellende Wirkung. Rezidive wurden bisher nicht beobachtet, obzwar über 50 Fälle schon seit Wochen entfiebert sind. Komplikationen traten sehr selten auf. Pneumonia crouposa bei einem tödlichen Typhus, Orchitis in der Rekonvaleszenz eines Paratyphus-B-Kranken. Bei Paratyphus A traten je einmal Angina Ludovici, Keratitis, einseitige seröse Pleuritis und Parotitis purulenta auf. In diesem letzten Falle trat auch der einzig beobachtete Decubitus auf. Die Mortalität war gering. Sie betrug im ganzen bisher vier Fälle (3-4%). (Bei der intravenösen Besredkabehandlung 9%.) Zwei Fälle von diesen beziehen sich auf zwei blutbakteriologisch-positive Typhuserkrankungen, die schon im schwersten Zustande aufgenommen wurden und bei denen die Methylenblaubehandlung ganz wirkungslos blieb und der Tod erst nach dem Aussetzen des Mittels (bei einem Pneum. croup. als Komplikation) eintrat. Der dritte Fall bezieht sich auf eine blutbakteriologisch-positive Paratyphus-B-Erkrankung, welche ohne Fieber, in Form einer Meningitis verlief und der ebenfalls in dem aller schwersten Zustand auf die Abteilung kam. Der vierte Fall betrifft einen bakteriologisch-negativen, klinisch wie auch bei der Sektion positiven mittelschweren Fall im Alter von 50 Jahren, der auf M. B. prompt reagierte und am sechsten fieberfreien Tag an Angina Ludovici erkrankte und an Herzschwäche zugrunde ging. Die Darmgeschwürswand der Leiche enthielt Paratyphus-B-Bazillen (Kultur). Wie vorher erwähnt, gefährliche Nebenwirkungen kamen nicht vor. Ein Teil der sonst auch an Diarrhöe leidenden oder zu Diarrhöen veranlagten Kranken reagierte öfters mit Diarrhöen. In diesen Fällen leistete Opium (Tinct. opii 3 x 10-15 Tropfen) gute Dienste. In Oblaten oder noch besser in Gelatinekapseln verabfolgtes Methylenblau verursachte nur selten Erbrechen. In diesen Fällen vertrugen die Kranken ausnahmslos das Mittel im Klysma (Einlauf) (täglich dreimal 40 cgr M. B. mit je 15 Tropfen Opiumtinktur, nach vorherigem Reinigungsklysma). Diese Darreichung per Klysma konnte öfters nach ein bis zwei Tagen wiederum durch die Darreichung per os ersetzt werden. Die Reizung des uropoetischen Systems ist unbedeutend. Spontan beklagten sich nur ein bis zwei Kranke über

brennen in der Urethra. Albuminurie trat nie auf. Es ist unangenehm, dass die Urethra-und Aftergegend wie auch die Wäsche blaugefärbt werden können. Es ist aber nicht zu vergessen, dass Urin, Stuhl bei diesen Kranken infektiös sind und infolge dessen ist eine jede Verunreinigung der Wäsche schon wegen Infektionsgefahr zu vermeiden. Die blaue Farbe dient höchstens als Indikator für das Vorgehen mit den Kranken und für die Beachtung der hygienischen Maßnahmen mit den infektiösen Entleerungen. Mit besonderer Sorgfalt gelingt es auch, diese Blaufärbung beinahe ganz zu eliminieren. Übrigens lassen sich diese Flecke durch Einlegen der Wäsche in 1% ige Lysollösung (zweimal je ein Tag) mit nachherigem Kochen in Sodalösung vollständig entfernen. Zusammenfassend kann behauptet werden, dass, wenn auch nach Verabreichung des Methylenblau kritische oder prompte Heilungen so oft wie nach intravenöser Besredka- oder Coli- Injektionen nicht vorkommen, andererseits doch dieser große Vorteil besteht, dass seine Anwendung gefahrlos ist und auch in den schwersten Fällen nicht kontraindiziert ist. Große Reaktionen (Schüttelfrost, Hyperpyrexie, kritischer Temperaturfall) werden ganz vermieden. Es kann auch von dem praktischen Arzte verabreicht werden. Kritische Heilungen traten in zirka 13 %, prompte Wirkungen in zirka 26%, ausgesprochene Beeinflussung in zirka 14% auf. In 47 % war keine Wirkung festgestellt. Schlechte Wirkung trat nie, Komplikationen nur selten auf. Rezidive wurden bisher noch nicht beobachtet. Die Mortalität betrug 3-4%. Indiziert ist ihre Anwendung in der Hand des praktischen Arztes: in jedem mittelschweren, schweren und sehr schweren Falle von Typhus, Paratyphus A und B (in den leichten Fällen wie auch im Stad. Decrementi überflüssig); in der Hand des Spezialarztes: in den schwersten Fällen dieser Erkrankungen, ebenso in Fällen schwerer Komplikationen (Pneum. croup., Myokarditis), bei denen die Reaktion auslösenden intravenösen Injektionen kontraindiziert sind; in jenen Fällen der mittelschweren und schweren Typhus-, Paratyphus-Erkrankungen, bei denen die hervorgegangene intravenöse Vaccinebehandlung wirkungslos blieb. In schwersten Fällen können nebenbei Digitalis, kalte Einpackungen verabfolgt werden. Von anderen Erkrankungen gab ich das Mittel in einzelnen schwereren, hartnäckigeren Fällen von Dysenterie mit gutem Erfolge. Ausführliche Mitteilung folgt demnächst.

Interessant an dieser Publikation ist, dass man erneut das Argument findet, dass der Impfschaden durch die Typhusimpfung wegdiskutiert wird, weil die Impfung kann die Symptome doch nicht ausgelöst haben… Man hatte also die Symptome der Krankheit mit welcher man geimpft wurde, und weil man mit den (abgeschwächten) Erregern geimpft wurde, kann es diese Krankheit nicht gewesen sein.

“Bakteriologisch-negativ waren 30 Fälle. In einem bedeutenden Teile dieser bakteriologisch-negativen, oft äußerst schweren Erkrankungen mag der negative Befund im Zusammenhange stehen mit der letzten Typhusschutzimpfung, welche in einem guten Teile dieser Fälle knapp vor der Erkrankung, also in der Inkubationszeit, sogar während der ersten Krankentage verabfolgt wurde. Infolgedessen kann der größte Teil dieser negativen Fälle als Typhus und nicht als Paratyphus angesehen werden.“

Bei bakteriellen Durchfallerkrankungen

Therapie der Gegenwart 1903 S. 323

“Bei unstillbaren Diarrhöen der Phthisiker (TBC-Patienten) hat sich, nach einer Mitteilung von L. Rénon in der Sitzung zum 27. Mai der Société de Thérapeuthique, das Methylenblau in 80% der Fälle gut bewährt. Das Mittel wurde in einer täglichen Dosis von 0,15 -0,20, mit einer vierfachen Menge von Milchzucker verrieben, in Oblaten gereicht. Die Stühle wurden vom ersten Tage an seltener und in drei Tagen schwanden gewöhnlich der Durchfall; manchmal ging er sogar in Verstopfung über. Diese Wirkung sei Folge der Antibakteriellen Eigenschaften des Methylenblaus, welches alle in die Tuberkulösen Darmgeschwüre gelangten Sekundär-infektiösen Keime zur Abtötung bringt.”

Auch 1940 ist Methylenblau noch als Mittel gegen Darmkatharre gelistet:

2 Wiener Medizinische Wochenschrift Nr. 13, 1940, S. 235

Unter Haus zähle ich auch im weitesten Sinne die Schleimhäute des Mundes denn auch da wurde Methylenblau bei Entzündungen eingesetzt

Gegen Pilzerkrankungen der Haut

1Österreichische Apotheker-Zeitung, Juli-Dezember 1953, S. 598f

“Farbstoffe gegen Pilzerkrankungen der Haut.

Bei Reisen in Osteuropa fielen mir im Straßenbild mancher Städte Passanten, Erwachsene und besonders viele Kinder auf, die auf Gesichts- und Kopfhaut, nicht selten auch auf den Händen, Farbflecken in den verschiedensten Tönungen zwischen Rot, Blau und Grün zur Schau trugen. Es handelte sich dabei durchaus um Anzeichen der dort beliebten Behandlungsmethoden der verbreiteten Dermatomykosen verschiedenen Ursprungs mit organischen Farbstoffen wie Methylenblau, Brillantgrün und anderen Anilinfarben. Diese organischen Farbstoffe wirken besonders in geeigneten Mischungen auf die meisten Erreger der “Hautflechten‘‘ zerstörend und vernichtend und bringen die sonst langwierigen Dermatonykosen verhältnismäßig rasch zum Abklingen und Verschwinden. Trotz der Wirksamkeit dürften sich Farbpinselungen gegen Pilzerkrankungen der Haut keiner Beliebtheit erfreuen und kommen bei uns nur für Patienten Betracht, die in der Krankenhausbehandlung mit der Außenwelt wenig in Berührung kommen.

Immerhin kam ich auch in öffentlichen Apotheken Wiens dazu, zwei Rezepte auszuführen, die in die Gruppe der Farbstoffmischungen gegen Dermatomykosen gehören: die „Solutio Millian‘“ und „„Solutio Castellani“. Da sie oft nicht ganz richtig verschrieben werden und ihre Zusammensetzung in der in Apotheken zugänglichen Literatur oft nicht auffindbar ist, will ich diese hier wiedergeben.

Solutio Millian:

Rp: Kristallviolett 0,25

Methylgrün 0,25

Spir. vini dil ad. 100,00

Diese Lösung hat sich besonders gegen die Erreger der Epidermatophylla hyperkeratotica inguinalis und interdigitalis bewährt. Noch wirksamer ist die intensiv rotviolettfärbende Solutio Castellani, deren Herstellung etwas komplizierter und zeitraubender ist:

" Solutio Castellani:

Rp. Fuchsin 1,0

solve in spiritu vini conc 9,0 (Am günstigsten erfolgt die Lösung im Wasserbade bei einer Temperatur von 35°C)

Phenoli liquef 5,0

Aquae dest. 95,0

Misce et filtra!

Adde Acide borici 1,0

et digere per horas duas,

deinde adide Acetoni

et digere per horas duas,

adde Resoreini crist. 10,0

Solve et filtra!

Die Solutio Castellani soll erst einige Tage nach der Herstellung verwendet werden, und zwar in der Weise, dass man die von Pilzen befallenen Hautstellen und ihre unmittelbare Umgebung 4 bis 5 mal im Tage damit kräftig einpinselt. In den Rahmen der Bekämpfung der Pilzerkrankungen mit stark färbenden Stoffen gehören auch die Pinselungen mit einer 40%igen Lösung von Prontosil in Aceton. B. Schulz.”

Cheilitis exfoliativa

Cheilitis = Lippenentzündung

“Cheilitis exfoliativa bezeichnet die chronische Form der Cheilitis simplex, bei der sich dicke braune Schuppen bilden, ähnlich einer Kruste. Diese Form kommt eher selten vor, wird aber als besonders unangenehm wahrgenommen. Warum eine Cheilitis chronisch wird, ist noch nicht abschließend erforscht.”

2 Mitteilung aus der Klinik für Haut- und Geschlechtskrankheiten der königl. ung. Peter Pázmány-Universität zu Budapest (Direktor: Dr. E. Neuber o. ö. Univ.-Professor). Die chronischen Entzündungen der Lippen mit Rücksicht auf die Cheilitis exfoliativa Von Privatdozent Dr. E. Szep, Adjunkt Wiener Medizinische Wochenschrift Nr. 42/43, 1943, S. 584

“Die Ch. lässt sich in jedem Falle schwer, oder überhaupt nicht beeinflussen; meistens werden Röntgen- und Radiumbestrahlungen angewandt. In dem oben erwähnten Falle erreichte Nekum durch längere Zeit vorgenommene Bepinselungen mit Methylenblau und Salbe Erfolg. Urbach empfiehlt Thyreoiden-Tabletten, Jordan laugige Bepinselungen und innerlich Lugolininjektionen. Unsere eigenen Behandlungsmethoden wurden in Zusammenhang mit den Fällen beschrieben.”

Noma oder Wangenbrand

“Noma oder Wangenbrand ist eine schwere bakterielle Erkrankung, die sich auf der Mundschleimhaut entwickelt und von dort ausgehend andere Weich- und Knochenteile des Gesichts zerfrisst. Nach Schätzungen der WHO sterben jährlich zwischen 80.000 und 90.000 Kinder an dieser Krankheit. Wegen der Besonderheit dieser Krankheit gibt es bis heute keine gesicherten Erhebungen.”3

Mehr zu Noma: https://gegen-noma.de/die-krankheit/

Therapie der Gegenwart 1895, S. 103

“Methylenblau bei Noma. G. F. Kostnerin berichtet über zwei Fälle von Noma, bei welchen, nach Anwendung aller gebräuchlichen Mittel (actuelle Cauterisation , Eisenchlorid, Thymol, Jodoform u. s.w.) ohne jeglichen Erfolg, er sich entschloss, stündlich die erkrankten Teile mit einer 25—30% wässerigen Methylenlösung zu färben. In wenigen Stunden verschwand der Fötor und die erkrankte Haut begann abzufallen; späterhin bildeten sich Narben. Ein Pat. starb schließlich an Erschöpfung, während der andere genas. (Wratsch, October 1894.)”

Skrofulose

“Skrofulose (auch Skrofeln oder Scrofuloderm, von lateinisch scrofula; „Halsdrüsengeschwulst“) ist die historische Bezeichnung einer Hauterkrankung. Am ehesten handelte es sich dabei um Fälle von Hauttuberkulose.”4

5

“Scrophulose

(siehe auch den Bericht über innere Medizin S. 274)

[…]

Alten.-Wiesbaden erzielte bei Scrophulose der Halslymphdrüsen, auch bei schon bestehender Fluktuation Heilung durch Injektion einer Pravaz-Spritze von einer 17% Methylenblau-Lösung, der einige Topfen Alkohol zugesetzt waren. (M. m. W. No. I.)”

Das Kleine Blatt Nr. 219, 8. August 1932, S. 10

“Wie man Arzneiflecken ausputzen kann.

Auch die erfahrenste Hausfrau weiß sich oft nicht zu helfen, wenn sie Arzneiflecken aus Kleidern oder Wäschestücken entfernen soll. Sie kennt ja die Mittel nicht, die die betreffenden Chemikalien zu lösen vermögen. Und so wird es gewiss erwünscht sein, wenn wir einmal die richtige Behandlung der Arzneiflecke — wenigstens der wichtigsten — zur Darstellung bringen.

Ein Mittel, das zu Gurgelwässern, Spülungen und anderen Zwecken häufig verwendet wird, ist das Übermangansaure Kali. Um die intensiven Flecke, die diese Chemikalie hervorruft, zu beseitigen, muss man sie mit einer fünf- bis zehnprozentigen Salzsäurelösung betupfen, nachher wird gründlich mit Wasser nachgewaschen. Statt der Salzsäure kann auch eine fünfprozentige Schwefelammoniumlösung genommen werden, auch in diesem Fall muss aber nachgewaschen werden.

Jodflecke kommen bei der großen Verbreitung und vielfältigen Verwendung der Jodpräparate natürlich besonders häufig vor. Die braungelben Flecke sind aber durch zwei Chemikalien zum Verschwinden zu bingen: Man kann eine zehnprozentige Natriumthiosulfatlösung oder ein zehnprozentiges Ammoniak verwenden.

Das Natriumthiosulfat dient auch zur Nachbehandlung von Silber- oder Höllensteinflecken. Ältere Silberflecke sowie Höllenstein oder Lapisflecke werden dann durch eine zehnprozentige Jodkalilösung leicht weggebracht, doch können durch dieses Mittel nun wieder andere Flecke hervorgerufen werden, gegen die man dann das Natriumthiosulfat anwenden muss. Die Jodkalibehandlung der Silberflecken wird bei der häufigen Anwendung von Silberpräparaten Protargol, Albagin, Argentamin usw.) gegen Hals und Nasenleiden und vor allem gegen den Tripper nicht selten notwendig.

Öl und Fettflecke sind, wenn sie medizinischer Herkunft sind, gewöhnlich nicht anders zu behandeln, als es sonst auch üblich ist. Durch Benzin oder Benzol und Bügeln unter einem ausgebreiteten Filtrierpapier wird das Fett gelöst und ausgezogen. Auf diese Weise können viele Salbenflecke, auch Lanolinflecke entfernt werden. Die Mineralöle, darunter auch die jetzt gern als Darmgleitmittel verwendeten Paraffinpräparate sowie die Vaseline, werden in derselben Art behandelt. Das Leinöl, das auch in dem bekannten Brandliniment enthalten ist, putzt man mit angewärmtem Amylalkohol, dem etwas Kalilauge zugesetzt wurde. Die Flecke, die das Brandliniment hinterlässt, müssen, da das Liniment auch Kalkwasser enthält, manchmal noch mit verdünnter Essigsäure nachbehandelt werden. Gegen das Rizinusöl bewährt sich das Benzin nicht gut, man kann aber die anderen Fettlösungsmittel, Benzol, Chloroform oder Äther (sehr feuergefährlich!), verwenden. Verunreinigungen mit Lebertran sind einfach mit Seife und warmem Wasser auszuwaschen.

Die Salben enthalten nicht selten Teerzusätze. Der Teerfleck wird, falls Seifwaschung nicht hinreicht, mit Terpentinöl geputzt; es muss dann mit Benzin nachgeputzt werden, um den Ölfleck wegzubringen. Das teerähnliche Ychthyol, dass jetzt in Behandlung von Hautleiden so beliebt , macht starke Flecke, die aber unschwer mit warmem Wasser und Seife entfernt werden können.

Stark fleckende Präparate, die in der modernen Medizin immer reichlicher Verwendung finden, sind die Teerfarbstoffe. Diese pflegen sehr arge Verunreinigungen zu erzeugen, auch kleinste Mengen können große Flecke machen. Zu den Teerfarbstoffen gehört zum Beispiel das Methylviolett und das Methylenblau, das jetzt gern zur Behandlung von Erkrankungen Harnblase verordnet wird. Man nimmt es in Pillenform ein, wodurch dann eine Blaufärbung des Urins zustande kommt. Und der gefärbte Urin kann nun selbst starke Farbflecke verursachen. Zur Beseitigung der Teerfarbenflecke werden mehrere Methoden empfohlen: Waschung mit Eau de Javelle (wässrige Lösung von Kaliumhypochlorit (KClO), in einer Mischung mit Kaliumchlorid (KCl)), Waschung mit zwölfprozentiger Salzsäurelösung: in beiden Fällen muss gründlich mit Wasser nachgewaschen werden. Andere Methoden sind komplizierter und sollen hier nicht beschrieben werden.”

Javelwasser gibt es noch bei Kaufland: https://www.kaufland.de/product/507310154/

“Javelwasser wurde ursprünglich nach dem französischen Stadtteil Javelle benannt und ist ein chemisches Mittel zur Bleichung von Textilien. Teilweise wird die Chemikalie auch als Eau de Javelle betitelt.

• Die Chemikalie Javelwasser besteht aus Kaliumhypochlorit, das sich in einer wässrigen Lösung befindet. Gemischt wird es zusätzlich mit Kaliumchlorid. Teilweise kommt auch eine Mischung mit Natrium anstelle des Kaliums vor.

• Seine Wirkung entfaltet Javelwasser durch seine oxidativen Eigenschaften, es kann also Elektronen aufnehmen. Da es eine Base ist, kann es zudem Bindungen spalten und neue Bindungen eingehen und dadurch Moleküle ändern.

• Meist wird Javelwasser als Bleichmittel von Textilien verwendet. Diese Wirkung wurde von Claude-Louis Berthollet entdeckt, der die Anwendung zur Bleichung auch eingeführt hat. Zudem werden auch Stockflecken dadurch entfernt.

• Diese Wirkung kommt dadurch zustande, dass Javelwasser besonders Proteine und Fette spalten kann und so die großen Moleküle in Bruchstücke zerteilt werden.

• Hinzu kommt seine Funktion als Rohrreiniger. Hierbei kommt aber meistens eine Mischung aus Natrium zum Einsatz und es wird dann als Eau de Labarraque bezeichnet.

• Zudem ist Javelwasser antimikrobiotisch und wird deswegen auch zur Desinfektion verwendet. Allerdings nicht zur Händedesinfektion, sondern zur Reinigung von Wasser in Schwimmbädern.

• Außerdem wird die Substanz in seltenen Fällen zur Desinfektion von Kork genutzt, welcher zum Verschließen von Weinflaschen genommen wird. Jedoch können hierbei für den Weintrinker unangenehme Gerüche entstehen.

• Auch diese Wirkung kommt durch die Zerstörung von Proteinen in Mikroorganismen und Bakterien zustande.”

Laut Focus: Javelwasser: Anwendung, Wirkung und Risiken | FOCUS.de

Man sollte also bei farbigen Textilien an einer Ecke probieren, die man nicht sieht, ob die Farbe gebleicht wird. Bei weißen Textilien deutlich weniger problematisch würde ich vermuten.

Hier hat jemand über die Anwendung bei Textilien berichtet: machwerk: Bleichen mit Eau de Javel

Therapie der Gegenwart Nr. 10 1916 S. 369 “Mitteilung aus einem k. u. k. Mob.-Res.-Spital. Über die Behandlung' der Typhus- und Paratyphus- (A und B) Erkrankungen mit Methylenblau. Von Dr. A. Galambos, k. u. k. Reg.-Arzt i. d. Res.

Albuminurie trat nie auf. Es ist unangenehm, dass die Urethra-und Aftergegend wie auch die Wäsche blaugefärbt werden können. Es ist aber nicht zu vergessen, dass Urin, Stuhl bei diesen Kranken infektiös sind und infolge dessen ist eine jede Verunreinigung der Wäsche schon wegen Infektionsgefahr zu vermeiden. Die blaue Farbe dient höchstens als Indikator für das Vorgehen mit den Kranken und für die Beachtung der hygienischen Maßnahmen mit den infektiösen Entleerungen. Mit besonderer Sorgfalt gelingt es auch, diese Blaufärbung beinahe ganz zu eliminieren. Übrigens lassen sich diese Flecke durch Einlegen der Wäsche in 1% ige Lysollösung (Benzalkoniumchlorid oder Chlorxylenol?) (zweimal je ein Tag) mit nachherigem Kochen in Sodalösung vollständig entfernen. Zusammenfassend kann behauptet werden, dass, wenn auch nach Verabreichung des Methylenblau kritische oder prompte Heilungen so oft wie nach intravenöser Besredka- oder Coli- Injektionen nicht vorkommen, andererseits doch dieser große Vorteil besteht, dass seine Anwendung gefahrlos ist und auch in den schwersten Fällen nicht kontraindiziert ist. Große Reaktionen (Schüttelfrost, Hyperpyrexie, kritischer Temperaturfall) werden ganz vermieden. Es kann auch von dem praktischen Arzte verabreicht werden. Kritische Heilungen traten in zirka 13 %, prompte Wirkungen in zirka 26%, ausgesprochene Beeinflussung in zirka 14% auf. In 47 % war keine Wirkung festgestellt. Schlechte Wirkung trat nie, Komplikationen nur selten auf. Rezidive wurden bisher noch nicht beobachtet. Die Mortalität betrug 3-4%. Indiziert ist ihre Anwendung in der Hand des praktischen Arztes: in jedem mittelschweren, schweren und sehr schweren Falle von Typhus, Paratyphus A und B (in den leichten Fällen wie auch im Stad. Decrementi überflüssig); in der Hand des Spezialarztes: in den schwersten Fällen dieser Erkrankungen, ebenso in Fällen schwerer Komplikationen (Pneum. croup., Myokarditis), bei denen die Reaktion auslösenden intravenösen Injektionen kontraindiziert sind; in jenen Fällen der mittelschweren und schweren Typhus-, Paratyphus-Erkrankungen, bei denen die hervorgegangene intravenöse Vaccinebehandlung wirkungslos blieb. In schwersten Fällen können nebenbei Digitalis, kalte Einpackungen verabfolgt werden. Von anderen Erkrankungen gab ich das Mittel in einzelnen schwereren, hartnäckigeren Fällen von Dysenterie mit gutem Erfolge. Ausführliche Mitteilung folgt demnächst.

Lysol gibt es auch noch in USA: Multi Purpose Cleaner Pours | Lysol US

Online bekommt man es hier: https://www.theamericanstore.de/Lysol-Clean-Fresh-118L oder hier https://drogerieusa.de/search.php?text=Lysol

Ich habe bei Wollteppichen und Baumwollshirts gute Erfahrungen mit Prino Teppichreiniger gemacht. Man muss aber mehrfach Einsprühen, das ist eine längere Prozedur über mehrere Tage.

Spülmaschinen Klarspüler hilft teilweise auch. Frische Flecken mit Klarspüler vorbehandeln und dann die Reste mit dem Prino Teppichreiniger nacharbeiten.

Das hängt etwas vom betroffenen Material ab und ob man “nur” 1% Lösung oder Pulverflecken hat. Pulverflecken sind schwieriger zu entfernen als die 1% Lösung.

1 'Therapeutische Monatshefte. 7. 1893 S. 326

“Für die Behandlung der Urethritis in allen Stadien sind zahlreiche Verfahren angegeben. Die Tinktionstherpie wir von Allen (Ref. Mon. f.D. XVI, 6) mit Pyoktanin und Boinet und Trintignau (Ref. Mon. f. D. XVI, 5) mit Methylenblau angeraten. Als eine Art Tinktionstherpie ist wohl auch das Verfahren von Clemens (Allg. Med. C. Ztg. 1) anzusehen, welcher seit langen Jahren mit ausgezeichnetem Erfolge Einspritzungen mit frisch ausgepresstem Heidelbeersaft ausführen lässt. Er hat übrigens schon 1872 die Behandlung mit Salbenbougies eingeführt.”

Die Therapie der Gegenwart 1896, S 103

“Methylenblau bei akuter Urethritis (Harnröhrenenzündung) wendete D'Aulnay innerlich mit sehr gutem Erfolge an: bei chronischer Urethritis blieb der Erfolg aus. Lokal wurden 5—ml. einer schwachen Methylenblaulösung in Urethra und Blase eingespritzt. Gegen gonorrhoische Vaginitis wurden Tampons mit folgender Lösung getränkt:

Methylenblau 10,0

Alkohol 15,0

Kali carb 0,2

Aq. destill 200,0

Zur Entfärbung der Vagina werden zwei Tage lang Glycerintampons eingelegt. (Bericht über Leistung auf dem Gebiete der Syph.. XXXII, 3. Heft.)”

Therapie der Gegenwart 1898, S. 265

“Gegen chronische Cystitis (Blasenentzündung, Harnblasenentzündung, Zystitis) empfiehlt Jais folgende Pillen:

Rp. Methylenblau 0,08

Talc. Venet. pulv. 0,12 (Pulvis Talci Salicylicus (N. F.)—Salicylated Powder Of Talcum.)2

Lanol. q. s .u .f. pil

D. tal. pil. Nr. XX.

S. Täglich 8 Pillen zu nehmen

(Ber. üb. d. Leistungen a. d. Gebiete d. Syphilis, 1897, Novemb.)”

3 Drogisten-Zeitung, 25. März 1904, S. 141

“Dr. H. Heils Urethralkapseln gegen Erkrankungen der Harnröhre, Ausfluss u. s. w. Bestandteile: Methylenblau 0.05, Santelöl 0.2, Copaivabalsam 0.2, Zimmtöl 0.05. “

4 Österreichische Apotheker-Zeitung, Januar-Juni 1958, S. 248

“Blaseninfektionen, infektiöse Prozesse der Harn- und Leber Gallenwege sind Indikationen für die Methylenblau-Urosept: Dragees der Firma Eggochemia, Wien XIX. Ein Dragee enthält Hexamethylentetramin-Natr. benzole. 0,075 g, Dimethylamino phenyldimethylpyrazolon 0,05 g, Methylenblau medicinale 0,018, Acid. phenylmethylbarbitur. 0,0025 g. Packung zu 30 Dragees.”

5 Österreichische Apotheker-Zeitung 19. Jahrgang Nr. 20, 15. Mai 1965, S. 354

In Asien wird Methylenblau bis heute bei Blasenproblemen eingesetzt.

6

“Über die Wirkung von Methylenblau auf die Säugetiere.

Von Prof. N. Kowalewsky in Kasan.

Die bahnbrechende Entdeckung Ehrlichs, dass das Methylenblau lebende Nerven färbt, hat eine besondere Methode für das histologische Studium des Nervensystems begründet. Gleichzeitig wurden aber Fragen angeregt über die biologische Beziehung dieses Farbstoffes zu anderen histologischen Elementen. Da man bei solchen Studien häufig auf Infusionen von Methylenblau in das Gefäßsystem des lebenden Tieres angewiesen ist und da die physiologische Wirkung des in Rede stehenden Stoffes gänzlich unbekannt ist, so entschloss ich mich, einige Versuche über die physiologischen Effekte der Infusionen von Methylenblau anzustellen. Meine Versuche habe ich an Hunden und Katzen angestellt. Wenn nötig, wurden die Tiere curarisiert. Das Methylenbau (von

Dr. GRÜBLER in Leipzig bezogen) wurde in einer 0,7% Natriumchlorid gelöst, im Verhältnis von 0,2 g. auf 100 ml. Die auf Körpertemperatur gebrachte Lösung wurde langsam in die Vena jugularis ext. oder in die Vena saphena eingespritzt. Bei den Versuchen stellte sich heraus, dass die Tiere diese Lösung, selbst in größeren Quantitäten, sehr gut vertragen. So sah z. B. eine Katze von 3250 g Gewicht, nach Einführung von 20 ml der Lösung (0,04 g Methylenblau) in die Venni saphena, nur die ersten Stunden etwas matt aus und hielt sich am folgenden Tage ganz munter.

Die kymographischen Messungen ergaben, dass der Einfluss des zu prüfenden Stoffes auf die Circulation unbedeutend und vorübergehend ist. Gewöhnlich trat nach Einführung jeder Portion, die 2 ml der Lösung betrug, eine temporäre Steigerung des Blutdruckes ein. Wurde die nächste Portion sogleich nach der vorhergehenden, bei noch gesteigertem Blutdruck, eingespritzt, so sank zuerst der Blutdruck beinahe bis zur Norm, worauf wieder Blutdrucksteigerung eintrat. Beispielsweise führe ich einen Versuch mit einer curarisierten Katze von 3500 g Gewicht an. Im Laufe von 20 Sec. wurden in die Vena saphena 2 ml der Methylenblaulösung eingeführt. Schon während der Injektion stieg der Druck in dem centralen carolisende in 16 Sec. von 161 bis auf 180 Mm Hg, d.h. auf +19 Mm. oder 12 %. Das Maximum betrug 182 Mm. Hg, d. h. +21 Mm. oder 13 %. Eine zweite Injektion von 2 ml, welche 10 Sec. nach der ersten ausgeführt wurde, verminderte den Blutdruck im Laufe von 7 s von 180 bis 161 Mm. Hg (d.h. bis zur Norm), steigerte ihn aber in den nächsten 10 Sec. bis auf 187 Mm., d.h. auf +26 Mm. oder 16 %. 30 Sec, nach der zweiten Einspritzung erreichte der Blutdruck wiederum die Norm. In diesem Versuche wurden im Laufe von 19 Min. im Ganzen 90 Injektionen zu je 2 ml gemacht, alle mit ähnlichen Resultaten und nach der 20. Dose, nachdem also im Ganzen 0,08 g Methylenblau eingeführt waren, kehrte der Blutdruck ebenso rasch zur Norm zurück, wie nach der ersten Infusion.

Was die Zahl der Herzschläge anlangt, so verminderte sie sich etwas nach jeder Einspritzung, kehrte aber bald wieder zur Norm zurück.

In Betreff des Schicksals des Methylemblau im eirculierenden den Blute kann ich zur Zeit, nur so viel sagen dass die Gegenwart dieses Stoffes im arteriellen Blute bloß in den ersten Minuten nach der Einspritzung in die Vene konstatiert werden konnte. So z. B. zeigte das arterielle Blut eines Hundes von 3730 g Gewicht welchem im Laufe von 7 min 28 ml Methylenblaulösung in die Vena jugularis ext. eingespritzt waren, nur in der ersten Probe, die 1 Min. nach der Einspritzung in einer Quantität von 12 ml entnommen war, dunkle Färbung und gab einen blauen Alkoholextrakt. Die zweite Probe (ca. 15 ml), 9 Min, nach der ersten entnommen, war schon bedeutend heller und gab einen schwach-grünlichen Alkoholextakt. Die dritte Probe (ca. 18 ml), 9 Minuten nach der zweiten entnommen, sah ganz normal aus und gab einen bräunlichen Alkoholauszug.

Was die Ausscheidung des Methylenblau im Blute anlangt, so habe ich gefunden, dass es leicht mit der Galle und dem -Harn ausgeschieden wird. Außerdem habe ich regelmäßig blaue Färbung der Contenta des Magens gesellen. In den Magen gelangt das Methylenblau höchst wahrscheinlich mit dem Magensaft. Ich habe nämlich 1 Mal im leeren Magen eine sauer reagirende, stark durch Methylenblau gefärbte Flüssigkeit gesehen. Endlich habe ich Me-thylenblau, wenn auch in geringer Menge, in der Tränenflüssigkeit (bei Pilocarpingaben) gefunden, ebenso im Speichel (bei Pikealpinwirkung, bei elektrischer Chordareizung). In lymphatischen Müssigkeiten, z. B. in der Pericatdialflüssigkeit und im Humor aqueus, habe ich vergebens nach Methylenblau gesucht.

Der Übergang dieses Stoffes in den Harn und in die Galle tritt fast sofort nach Einführung der Lösung ins Blut ein und ist mit einer Beschleunigung der Ausscheidung genannter Sekrete verbunden. Besonders war das am Urin zu konstatieren. Die Beschleunigung der Harnausscheidung trat früher und intensiver ein. Andererseits trat hier auch früher und entschiedener die nachträgliche Verlangsamung der Sekretion ein. Die Speichelabsonderung wurde auch bis zu einem gewissen Grade durch Methylenblau angeregt.

Wenn man die Quantität des ins Blut eingeführten Farbstoffes in dem Versuche berücksichtigt und die Färbung der verschiedenen Sekrete im Auge behält, so kommt man zu dem Schluss, dass das rasche Verschwinden des Methylenblau aus dem Blute durch direkte Entfernung mittels der Sekrete nicht erklärt werden kann. Daher muss entweder eine Ablagerung des Farbstoffes in den Organen oder eine Zersetzung desselben, vielleicht auch beides gleichzeitig, vorausgesetzt werden. Wenn ich die mit Methylenblau infundierten Tiere rasch durch die Carotis verbluten ließ, so konnte ich nur in wenigen Organen eine klar ausgesprochene Blaufärbung (Ablagerung des Farbstoffes) konstatieren. Constant war die Ablagerung des Farbstoffes im Pankreas und in der Hypophysis cerebri, häufig in den Lymphdrüsen (Pankreas Aselli, Bronchialdrüsen, Drüsen in der Nähe der GI. submaxillaris), im Magen, im Darm, manchmal in den Nieren, in der Leber (unklar wegen der Eigenfarbe), in der GI, submaxillaris und Gl. sublingualis und in einigen Muskeln. Die Nieren, die Unterkieferdrüse und Gl. sublingualis, sowie das Gehirn bläuten sich gewöhnlich erst an der Luft und vornehmlich auf Schnittflächen. Unter diesen Umständen färbten sich am raschesten und intensivsten die Nieren, besonders in der Marksubstanz. Die Färbung des Gehirns trat nur allmählich ein und betraf hauptsächlich die graue Substanz. Die Färbung dieser Organe konnte beschleunigt werden durch oxydierende Substanzen, z. Bsp. durch rotes Blutlaugensalz. Die intra vitam gefärbten Organe färbten sich gewöhnlich noch intensiver an der Luft und unter dem Einfluss von oxydierenden Substanzen.

Diese Tatsachen sprechen dafür, dass viel Farbstoff in den Organen in Form von reduziertem Leukoprodukt abgelagert ist.

Bei der Voraussetzung, dass diese Reduktion unter dem Einfluss der physiologischen Tätigkeit der Organe vor sich geht, sollte man in Anbetracht der mitgeteilten Tatsachen meinen, dass die physiologische Desoxydation des Methylenblau am wenigsten im Pankreas und in der Hypophysis cerebri, am stärksten aber in der Niere vor sich geht.

Einige Organe bläuten sieh in meinen Versuchen weder bei Lebzeiten, noch nach dem Tode bei Luftzutritt. Freilich konnte das bei der Leber, der Milz und dem Herzen von der mehr oder weniger intensiven Eigenfarbe des Organs abhängen, wodurch das Methylenblau verdeckt wird. — Diese Erklärung ist aber nicht statthaft in Bezug auf die pigmentfreie Lunge der Katzen und der Hunde. In den eben genannten Organen konnte aber der Farbstoff entdeckt werden, wenn man Stücke von ihnen in siedendes Wasser legte, darauf rasch abkühlte und an der Luft liegen ließ (eine Methode, die Ehrlich bei seinen Versuchen mit anderen Farbstoffen benutzt hat). Bei solch einer Behandlung gelang es mir, nicht nur eine deutliche Färbung (mit grünlicher Nuance) an Organen mit intensiver Eigenfarbe, wie Leber, Milz und Herz, hervorzurufen, sondern auch an einigen vordem vollkommen farblosen Organen, wie z. B. an den Lungen.

Kasan, den 14./26. Februar 1888.”

2

Wenn man also seinen Hund oder Katze mit Methylenblau behandelt, dürfte nach diesen Versuchen klar sein, dass es schwierig sein dürfte, die Tiere überzudosieren. Hund und Katze vertragen Methylenblau anscheinend sogar intravenös in sehr hohen Dosen.

In verdünnter Milch vertragen es meine Versuchskatzen 1-2 Tropfen sehr gut und mögen es.

Zugesendet wird mit immer diese deutsche Übersetzung:

https://telegra.ph/Die-%C3%BCberraschenden-gesundheitlichen-Vorteile-von-Methylenblau-06-28

Der Inhalt des Artikels ist ansonsten gut, obwohl Quellen und Fußnoten fehlen, ist der Inhalt korrekt bis auf eine Kleinigkeit:

“Wie bereits erwähnt, ist Methylenblau ein Hormonpräparat, so dass niedrige Dosierungen den gegenteiligen Effekt wie hohe Dosierungen haben.”

Die Übersetzung verlinkt leider nicht auf den ursprünglichen Artikel, diesen findet man hier im Archiv, da das Original hinter eine Bezahlschranke ist.

Benefits and Side Effects of Methylene Blue - A Comprehensive Guide

Erst dachte ich, im Artikel von Antiilluminaten TV ist möglicherweise ein Übersetzungsfehler des Transkripts eines Videos, in welchem Dr. Mercola Gonzalez-Limas interviewed.

The Surprising Health Benefits of Methylene Blue — Interview with Francisco Gonzalez-Lima, Ph.D.

Schaut man ins Transkript des Videos, merkt man, dass Mercola den Fehler selbst auch macht, diese Konzepte nicht zu differenzieren.

Also NEIN Methylenblau ist kein Hormon und es wirkt nicht hormonell.

Mann muss unterscheiden zwischen Hormesis, Hormon und hormonell wirkende Chemikalien.

1. “Hormesis ist ein Phänomen der Dosis-Wirkungs-Beziehung, das durch eine Stimulation bei niedrigen Dosen und eine Hemmung bei hohen Dosen gekennzeichnet ist und wurde in sorgfältig konzipierten Studien häufig beobachtet und lässt sich weitgehend verallgemeinern, da es unabhängig von chemischen/physikalischen Wirkstoffen, biologischen Modellen und gemessenen Endpunkten ist. Dieses wenig beachtete und unterschätzte Konzept hat das Potenzial, die Toxikologie und verwandte Disziplinen in Bezug auf Studiendesign, Auswahl von Tiermodellen, Endpunktwahl, Risikobewertungsmethoden und zahlreiche andere Aspekte, einschließlich Chemotherapeutika, grundlegend zu verändern.”1

2. Hormon: “Hormone sind Signal- und Botenmoleküle, die der Regulation der verschiedenen Körperfunktionen dienen. Sie können von hormonbildenden Zellen in das umliegende Gewebe (parakrine Sekretion) oder in die Blutgefäße abgegeben werden (endokrine Sekretion).“2

3. Hormonell wirkende Stoffe aka endokrine Disruptoren aka Hormonstörer: “Endokrine Disruptoren (ED) sind Chemikalien oder Mischungen von Chemikalien, die die natürliche biochemische Wirkweise von Hormonen stören und dadurch schädliche Effekte (z.B. Störung von Wachstum und Entwicklung, negative Beeinflussung der Fortpflanzung oder erhöhte Anfälligkeit für spezielle Erkrankungen) hervorrufen.”3

Hormesis ist die sprachliche Wurzel für Hormon, diese beiden Worte sind linguistisch miteinander verwandt.

Da aber Methylenblau kein endokriner Disruptor ist und auch kein körpereigenes Hormon ist, kann im Kontext der Dosierung von Methylenblau nur Hormesis gemeint sein.

Ein Beispiel ist ALC-0315 und seine Ennantiomere, die unterschiedlich Toxisch sind1 bzw. Chiralität ganz allgemein.

Schon die Anhänge an den Seiten der Grundstruktur können die Eigenschaften eines Moleküls stark verändern, bei den Azofarbstoffen z. Bsp. die Farbe:

2

Ein weiteres Beispiel ist das Antibiotikum Chloramphenicol. Das Enzym CATI packt an das nur eine Acetylgruppe (Ac) und schon ist das Antibiotikum nicht mehr antibiotisch.

3

Die Moleküle sehen fast noch identisch aus, aber eben nur fast. Ihre Eigenschaften können aber bereits sehr unterschiedlich sein.

Es gibt nun Ärzte, die behaupten, Methylenblau wäre gefährlich, weil es die Grundstruktur verschiedener Psychopharmaka hätte. Dem ist nicht so, wie man bereits 1967 bei R. Degkwitz im Leitfaden der Psychopharmakologie, Wissenschaftliche Gesellschaft M.B.H. Stuttgart auf S. 13f nachlesen kann.

Die Wirkung wird von den Seitenkennten bestimmt nicht vom Grundgerüst.

B. Chemische Struktur der Psycholeptika

Phenothiazinderivate und chemisch nahe verwandte Substanzen

Phenothiazin ist mit dem Methylenblau chemisch nahe verwandt, wie die Abbildung zeigt. Beide Substanzen sind Fermentinhibitoren. Sie haben in abgeschwächtem Maße Wirkungen, die bei den Phenothiazinderivaten besonders stark hervortreten, und zwar sympathikolytische Effekte, Einfluss die Körpertemperatur und potenzierende Wirkung auf Barbiturate. Beide haben aber keine hypnotischen oder narkotischen Wirkungen.

Durch Substitutionen mit längeren Seitenketten am Stickstoffatom und am 3. Kohlenstoffatom (nach amerikanischer Zählung am 2. Kohlenstoffatom), das sich in Parastellung zu dem mit dem schwefelsubstituierten Kohlenstoffatom des rechten Phenolringes befindet, entstehen die klinisch wirksamen Phenothiazinderivate (nicht weitere „Phenothiazine”). Bei den klinisch wichtigen Phenothiazinderivate sind entweder Aminoäthyl- oder Aminopropyl-Seitenketten am Stickstoffatom substituiert. Bei den Substanzen mit der Kette N-C-C-N handelt es sich um hochwirksame Antihistaminika, z. B. Promethazin (Atosil), Phenethazin (Anergan) und Thiaziarnium (Pasidal). Bei den Substanzen mit einer Propyiseitenkette treten die zentralen europlegischen Wirkungen (sedative, antiemetische, potenzierende und hypothermisierende) in den Vordergrund, während die Antihistaminwirkung nur noch relativ gering ausgeprägt ist. Neben der Art der Seitenkette ist die Substitution der Aminogruppe am Ende der Seitenkette von Bedeutung. Bei dem stark wirksamen Antihistaminikum Promethazin ist der Aminostickstoff mit 2 Methylgruppen substituiert, Werden die Methylgruppen durch Äthylgruppen ersetzt, wie dies bei Diethazin (Diparcol, Latibon) und isothiazin (Dibutil, Parsidol) der Fall ist, so geht die Antihistaminwirkung zurück.“

Verwendung in der Psychiatrie

Methylenblau wurde jedoch tatsächlich in der Psychiatrie eingesetzt, obwohl ich sagen würde, dass einige der Anwendungen, wie bei Epilepsie heutzutage eher in den Bereich der Neurologie gehören.

Therapie in der Gegenwart 1904, S. 182

“Die Anwendung von Methylenblau in der psychiatrischen Praxis empfehlen A. M. Saizeff und N. N.Toporkoff. Unter eingehender Berücksichtigung der einschlägigen Literatur berichten Verfasser über 21 Fälle von maniakalischer Erregung, 9 Fälle von schwerer Asomnie und 7 Fälle von Epilepsie, bei denen sie Methylenblau angewandt haben. Sie gaben dasselbe subcutan in Dosen von 0,03 bis 0,09 oder per os mit der dreifachen Menge von Nux moschata. Die Resultate, zu welchen die Autoren gelangen, sind kurz gefasst folgende:

1. Das Methylenblau wirkt in den meisten Fällen beruhigend auf erregte Kranke.

2. In Fällen von Schlaflosigkeit, die nicht durch maniakalische Erregung hervorgerufen sind, wirkt Methylenblau ebenso gut wie andere indifferente Hypnotica.

3. Die vorsichtige Anwendung von Methylenblau ist mit keinen ernsten üblen Nebenwirkungen verknüpft.

Trotzdem das Methylenblau häufig Personen gegeben wurde, deren Herztätigkeit nicht ganz intakt war, konnten Verfasser nie irgend welche Störungen von Seiten des Herzens bzw.. der Lungen beobachten. Auch zeigte das Körpergewicht sogar bei längerem Gebrauch des in Rede stehenden Mittels keine erheblichen Schwankungen, oft konnte ein beträchtlicher Zuwachs konstatiert werden. Wurde das Mittel per os gegeben, so klagten die Kranken hin und wieder über ‚Schmerzen im Epigastrium und Übelkeit. Einmal trat sogar Erbrechen ein. Das Aussetzen des Mittels reichtjedoch aus, um alle Beschwerden zu beseitigen. Nur einmal beobachteten Verfasser nach der Einnahme von Methylenblau Urindrang, der bekanntlich ohne gleichzeitige Verordnung von Muskatnuss (semen Meristici) häufig vorkommt. N. Grünstein (Riga). (Obosrenije psychiatrii 1003, Nr. 4 und 5.)”

Methylenblau bei Epilepsie

4 Wiener Medizinische Wochenschrift Nr. 19, 1900, S. 932

“41. Methylenblaugegen Epilepsie versuchte Paoli (Riform. med. Nr. 62, 1899, IV) in 9 Fällen. Er gab es entweder zwei Mal täglich intern in Gaben von 0,30 in Pillen oder subcutan 0,10 g. Die Resultate waren bei stomachaler Einverleibung besonders günstige. Offenbar wird durch das Mittel die Resorption von im Verdauungskanal sich bildenden Toxinen verhindert, so dass schon dadurch die epileptischen Anfälle weniger häufig ausgelöst werden müssen.”

5 Deutschösterreichische Tages-Zeitung Nr. 99, 24. April 1927, S. 13

“Epilepsie. Die meisten Geheimmittel gegen Epilepsie enthalten — wenn sie wirksam sind — Bromsalze und Baldrianpräparate. Es ist daher ganz überflüssig, sie anzuwenden. Sehr oft wird dabei auf die Leichtgläubigkeit des Publikums gerechnet und allerlei Schwindel getrieben. Das Münchsche „Antiepilepticum“ besteht aus einer blauen Farbe (Methylenblau) und baldriansaurem Zink; es ist harmlos.“

1 Die 4 Häm-Gruppen sind als Stöckchenmodelle im Schleifenmodell des Proteins dargestellt.

Häme sind eine Familie von Molekülen. Häme haben in ihrer Mitte ein Fe2+ Ion. Im roten Blutkörperchen des Menschen ist das Häm B.

2

Normalerweise liegt das Eisen im Blut/Häm b als Fe2+ vor.

Beim Methemoglobin liegt das Eisen in der Häm-Gruppe als Fe3+ vor.

Als Methämoglobinämie bezeichnet man in der Medizin den erhöhten Gehalt von Methämoglobin (MetHb) im Blut. ICD10-Codes: D74.0, D74.8, D74.93

Methämoglobinämie kann verschiedene Ursachen haben, z. Bsp. Vergiftung, verschiedene Medikamente oder einen reduzierten Abbau des Methämoglobins (MetHb) wegen angeborenem Angeborener Methämoglobinreduktase-Mangel oder Glucose-6-Phosphat-Dehydrogenase-Mangel.4

Am 28. November 2013 berichtete die Schweizer Zeitung 20 min über die Fugate Familie aus Kentucky.

1820 ließ sich ein französischer Einwanderer mit seiner jungen rothaarigen Frau an den Ufern des Troublesome Creek im dünn besiedelten östlichen Kentucky nieder. Hier zeugten Martin Fugate und Elizabeth Smith sieben Kinder.

Soweit liegt nicht viel Außergewöhnliches in dieser Familiengeschichte. Doch vier der Fugate-Kinder waren alles andere als gewöhnlich: Sie sollen blau gewesen sein. Mit Fugate und Smith hatten sich nämlich nicht nur ein Franzose und eine Amerikanerin gefunden; es waren auch zwei seltene Erbanlagen aufeinander getroffen, die den Blauschimmer in der Haut der Nachkommen bewirkten.

5

Beide Eltern hatten möglicherweise rezessiv (also nur auf einem der beiden Chromosomen) ein kaputtes Methämoglobinreduktase Gen, so dass die eine Kopie bei ihnen für normale Hautfarbe reichte, aber die Kinder eine 50% Chance hatten homozygot (also auf beiden Chromosomen), das kaputte Gen zu haben.

Man kennt heute etwas ähnliches, die Hämoglobin-M-Krankheit: “Eine seltene Hämoglobinopathie, die durch das Vorhandensein von Hämoglobinvarianten mit strukturellen Anomalien im Globin-Teil des Moleküls gekennzeichnet ist, die zu einer Autooxidation von Häm-Eisen führen, was eine Methämoglobinämie zur Folge hat. Die Patienten zeigen eine Zyanose, für die keine Behandlung erforderlich ist. Der Vererbungsmodus ist autosomal-dominant.” 6

Bei den Fugates scheint mir die Vererbung rezessiv gewesen zu sein, weil die Eltern und einige Geschwister nicht betroffen waren, was gegen Hämoglobin-M-Krankheit sprechen würde.

20 min berichtet weiter:

“Diese erbliche Methämoglobinämie tritt allerdings nur auf, wenn beide Elternteile das rezessive Gen besitzen — angesichts der Seltenheit des Defekts eine sehr unwahrscheinliche Angelegenheit. Doch in den abgelegenen und unwegsamen Appalachen kamen die Leute nicht weit herum; oft heirateten sie Partner, die mit ihnen verwandt waren. Die genetische Anlage der Fugate für den Enzymdefekt breitete sich auf dem Cumberland-Plateau aus und immer wieder gab es Fälle von ausgeprägter blauer Hautfarbe: die blauen Menschen vom Troublesome Creek. 1890 soll es ein halbes Dutzend von ihnen gegeben haben.

Zu Beginn der Sechzigerjahre hörte der Arzt Madison Cawein von dem blauen Phänomen. Es gelang ihm, mehrere blaue Mitglieder des Clans ausfindig zu machen. Cawein behandelte sie mit einer Injektion von Methylenblau, das zu einer Redoxreaktion führt, in der das Methämoglobin zu Hämoglobin reduziert wird. Die Geschwister Patrick und Rachel Ritchie waren die ersten, die von Cawein behandelt wurden — sie wurden innerhalb von Minuten rosa.

Natürlich war die Verwandlung nicht von Dauer, doch die Ritchies und nach ihnen die anderen blauen Menschen erhielten nun Pillen mit Methylenblau, mit denen sie ihre Hautfarbe normalisieren konnten.

Heute sind die Verkehrsbedingungen auch in den Appalachen bedeutend besser. Inzest und Verbindungen von Verwandten sind seltener geworden; die «blauen Gene» der Fugate treffen nur noch selten aufeinander: Die blauen Menschen sind am Aussterben.”

Sogar Science berichtete 1982 über diese Familie: https://web.archive.org/web/20150927104846/https://academic.csuohio.edu/neuendorf_ka/com370/370_blue_people.pdf

PLOS hatte einen Artikel über diese Familie: https://dnascience.plos.org/2016/09/22/finding-the-famous-painting-of-the-blue-people-of-kentucky/

In USA sind sie wohl auch Schulstoff: https://www.nclark.net/BluePeopleofTroublesomeCreek

Weil man mit ihnen schön Genetik unterrichten kann:

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Deutsche Medizinische Wochenschrift 1892, Nr. 13, S. 286

“Bresgen. Über die Verwendung von Anilinfarbstoffen bei Nasen-, Hals- und Ohrenleiden. Nach einem auf der Versammlung deutscher Naturforscher und Ärzte in Halle a. S. 1891 gehaltenen Vortrage. Wiesbaden, Jungklaas, 1891. Ref. Max Schaeffer (Bremen).

Verfasser glaubt nach seinen Erfahrungen berechtigt zu sein, den von ihm seit 1 1/2 Jahren benutzten Anilinfarbstoffen eine hervorragend eiterverhindernde und eiterzerstörende Kraft beimessen zu dürfen. Dabei hat sich ihm das Methylenblau in hohem Grade als schmerzmildernd erwiesen.

Voraussetzung für die von ihm erprobten Eigenschaften ist ein reines Präparat und eine äußerst sorgfältige Anwendung, deren Details im Originale nachgelesen werden müssen.

Verfasser war bei Anwendung des Pyoktanin zu keinem voll befriedigenden Erfolg gelangt, wie es Ref. u. a. auch ergangen ist. Er versuchte es deshalb mit dem Methylenblau, das er gleich nach dem Ätzen, Brennen, Meißeln etc. unter besonderen Kautelen in die Nase bringt. Es wird dadurch die Schwellung verhindert und ebenso eine zu bedeutende Schorfbildung, welche außerdem die operierte Nase meist für mehrere Tage vollständig verlegt. Außerdem sollen die Schmerzen dadurch vermindert werden. Die Heilung, welche sonst in mehreren Wochen erst unter oft starker Eiterbildung erfolgte, soll auf diese Weise bedeutend beschleunigt, die Eiterung vermindert, der Erfolg ein sicherer werden.

An der Hand von Krankengeschichten wird die Anwendungs- und Wirkungsweise ausführlich geschildert. Drei Fälle von jahrelang bestehenden Ohreneiterungen wurden gleichfalls in kurzer Zeit geheilt. Unangenehme Nebenwirkungen will Verfasser nie beobachtet haben.

Ref. kann des Verfassers Angaben über die günstigen Wirkungen des Pyoktanin wenigstens bei Kehlkopferkrankungen, bei malignen Nasenpharynxerkrankungen voll bestätigen.

Jedenfalls verdient des Verfassers Arbeit die volle Beachtung der Fachkollegen, welche die angegebene Methode prüfen und des Verfassers Schlussfolgerungen hoffentlich bestätigen werden.”

Anmerkung: Pyokantin ist ein Synonym für Kristallviolett.1

Deutsche Medizinische Wochenschrift 1892, Nr. 30, S. 698

“Alle die angeführten Gründe sprechen dafür, dass der Standpunkt einiger Rhinologen, nach der Kauterisation „nichts zu tun“, aufgegeben werden muss, und dass es gewiss wünschenswert ist, eine Methode zu haben, welche imstande ist, die unmittelbaren Reaktionserscheinungen zu mildern und schweren Nachkrankheiten vorzubeugen. Moldenhauer hält es für zweckmäßig, durch vorsichtiges Ausspülen mit Borsäure die Entfernung der verbrannten Gewebsteile zu erleichtern sowie die Zersetzung hintenanzuhalten. Scheff rät, die Nase mit lauern Wasser oder mit irgend einem Tee zu reinigen und den Schorf mit Mandelöl zu bestreichen. Suchannek in Zürich empfahl 1889, vor und nach den Operationen in der Nasenhöhle möglichst streng nach antiseptischen Grundsätzen zu verfahren, event. Tamponade der Nase mit Jodoformgaze. Rice macht vor der Operation eine lauwarme, alkalische und dann eine antiseptische Nasendusche mit 0,1: 1000 Sublimat, und Barth lässt ein 10—15 % iges Kokainpulver einblasen oder aufschnupfen. Die größte Aufmerksamkeit und Mühe verwendet jedenfalls Bresgen auf die Nachbehandlung. Auf dem X. internationalen Kongress und in weiteren Mitteilungen meldete er, dass er anfänglich täglich, später alle zwei Tage eine 0,2—0,4%ige Pyoktaninlösung auf galvanokaustisch gesetzte Wunden aufpinsele; auf der letzten Naturforscherversammlung empfahl er die Anwendung des Methylenblaus in gleicher Weise. So vorzüglich sich auch die angeführten Methoden bei ihren Empfehlern bewahrt haben mögen, so wenig zweifelhaft ist es, dass sie keinen Eingang in die Praxis der Rhinologen finden.

Bei archive.org wurde ich letztendlich auch fündig:

The Lancet 1901-09-21: Vol 2 Iss 4073 : Free Download, Borrow, and Streaming : Internet Archive https://archive.org/details/sim_the-lancet_1901-09-21_2_4073/page/774/mode/2up

THE OCCURRENCE OF GREEN OR BLUE URINE AND ITS MOST FREQUENT CAUSE  
BY F. PARKES WEBER. M.D. CANTAB., F.RC.P. LOND., PHYSICIAN TO the German Hospital, Dalston  
So much has been written, especially in France, on the effects of the ingestion of methylene blue on the urine, that one would think that there was little more to be said on the subject. It happens occasionally, however, that apparently healthy subjects, mostly children, pass green or blue urine, though they are unaware of having swallowed methylene blue or any other similar anilin dye in any form. Medical men not familiar with the characteristic properties of methylene blue and the reactions of urine coloured with methylene blue are therefore very apt to seek some other explanation — for instance, such an unusual one as that indigo blue, derived by fermentation from indican, is present in the urine before it leaves the body. As a matter of fact, apart from the greenish urine resulting from the presence of biliverdin and apart from the somewhat greenish urine of carboluria, practically all cases in which green or blue urine is voided are due to the ingestion of methylene blue or a similar anilin dye, though some poisonous plants may make the urine green and Zünzer 1 recorded the case of a boy who became severely ill after eating the leaves of Cytiana alpinus and pissed a large quantity of urine having a grass-green colour. I am even sceptical of the power of indigo, given medicinally or otherwise, to colour the urine green. At all events, whereas a capsule containing one decigramme of methylene blue will make the urine green or blue during the next three or four days, several doses of the same amount of indigo have no effect of this kind, the colour of the urine remaining unaltered or simply becoming yellower or more decidedly orange. I think that when apparently healthy persons in England pass green or blue urine without obvious cause the real explanation is generally that they have indulged in sweets coloured with methylene blue, particularly certain purple sweets. These latter contain a mixture of dyes and the urine passed after eating them is greenish. Thus, the supposed "unaccountable" secretion of green urine generally occurs in children and young women who like sweets. As a considerable quantity of sugar has to be swallowed for the urine to become deeply coloured (other kinds of sweets are likely to be eaten at the same time as those containing methylene blue) it is not surprising that some of those who secrete green urine should suffer from digestive troubles and a general metabolic disturbance, the latter showing itself by a sediment of uric acid or calcium oxalate 2 crystals in the urine. These disagreeable effects are certainly not so readily produced by swallowing pure methylene blue (medicinally) in considerably greater amount than that contained in the sweets.  Last April a practitioner gave me a specimen of green urine from a woman, aged 28 years, who had been passing similar urine for four days. The ordinary tests for methylene blue gave positive results, and though the patient was not aware of having taken methylene blue in any form she had, as she acknowledged, been eating sweets. The urine was of specific gravity 1023, acid, free from sugar and albumin, but loaded with small uric acid crystals. Perhaps some hepatic disturbance due to indulgence in sweets accounted for the uric acid sediment. Later, in June, through the kindness of Dr. A. E Garrod, I obtained a specimen of bluish-green urine from a girl, aged nine years, together with a sample of sweets similar to those which she had been eating. The urine was of specific gravity 1022. acid, and free from albumin and sugar, but after standing it deposited a sediment of oxalate of calcium crystals. The ordinary tests    

DAS AUFTRETEN VON GRÜNEM ODER BLAUEM URIN UND SEINE HÄUFIGSTE URSACHE

VON F. PARKES WEBER, M.D. CANTAB., F.RC.P. LOND., ARZT AM DEUTSCHEN KRANKENHAUS IN DALSTON

Es wurde bereits so viel, insbesondere in Frankreich, über die Auswirkungen der Einnahme von Methylenblau auf den Urin geschrieben, dass man meinen könnte, es gäbe zu diesem Thema kaum noch etwas zu sagen. Gelegentlich kommt es jedoch vor, dass scheinbar gesunde Personen, meist Kinder, grünen oder blauen Urin ausscheiden, obwohl sie nicht wissen, dass sie Methylenblau oder einen anderen ähnlichen Anilinfarbstoff in irgendeiner Form eingenommen haben. Mediziner, die mit den charakteristischen Eigenschaften von Methylenblau und den Reaktionen von mit Methylenblau gefärbtem Urin nicht vertraut sind, neigen daher sehr dazu, nach einer anderen Erklärung zu suchen – beispielsweise einer so ungewöhnlichen wie der, dass Indigoblau, das durch Fermentation aus Indikan entsteht, im Urin vorhanden ist, bevor dieser den Körper verlässt. Tatsächlich sind, abgesehen von grünlichem Urin aufgrund von Biliverdin und etwas grünlichem Urin bei Karbolurie, praktisch alle Fälle, in denen grüner oder blauer Urin ausgeschieden wird, auf die Einnahme von Methylenblau oder einem ähnlichen Anilinfarbstoff zurückzuführen, obwohl einige giftige Pflanzen den Urin grün färben können und Zünzer 1 den Fall eines Jungen beschrieb, der nach dem Verzehr der Blätter von Cytiana alpinus schwer erkrankte und eine große Menge grasgrünen Urin ausscheidete. Ich bin sogar skeptisch, ob Indigo, medizinisch oder anderweitig verabreicht, die Fähigkeit besitzt, den Urin grün zu färben. Während eine Kapsel mit einem Dezigramm Methylenblau den Urin in den nächsten drei bis vier Tagen grün oder blau färbt, haben mehrere Dosen derselben Menge Indigo keine solche Wirkung, die Farbe des Urins bleibt unverändert oder wird lediglich gelber oder deutlich orangefarbener. Ich denke, wenn scheinbar gesunde Menschen in England ohne ersichtlichen Grund grünen oder blauen Urin ausscheiden, liegt die wahre Erklärung in der Regel darin, dass sie mit Methylenblau gefärbte Süßigkeiten, insbesondere bestimmte violette Süßigkeiten, gegessen haben. Letztere enthalten eine Mischung aus Farbstoffen, und der Urin, der nach dem Verzehr ausgeschieden wird, ist grünlich. So tritt die vermeintlich „unerklärliche” Ausscheidung von grünem Urin in der Regel bei Kindern und jungen Frauen auf, die Süßigkeiten mögen. Da eine beträchtliche Menge Zucker aufgenommen werden muss, damit der Urin eine intensive Färbung annimmt (wahrscheinlich werden gleichzeitig mit den methylene bluehaltigen Süßigkeiten auch andere Süßigkeiten gegessen), ist es nicht verwunderlich, dass einige der Personen, die grünen Urin ausscheiden, unter Verdauungsbeschwerden und einer allgemeinen Stoffwechselstörung leiden, die sich durch eine Ablagerung von Harnsäure oder Kalziumoxalat-Kristallen im Urin äußert. Diese unangenehmen Auswirkungen treten sicherlich nicht so leicht auf, wenn reines Methylenblau (medizinisch) in wesentlich größeren Mengen als in Süßigkeiten enthalten ist, eingenommen wird. Im April letzten Jahres gab mir ein Arzt eine Probe grünen Urins einer 28-jährigen Frau, die seit vier Tagen ähnlichen Urin hatte. Die üblichen Tests auf Methylenblau fielen positiv aus, und obwohl die Patientin nicht wusste, dass sie Methylenblau in irgendeiner Form eingenommen hatte, gab sie zu, Süßigkeiten gegessen zu haben. Der Urin hatte eine spezifische Dichte von 1023, war sauer, frei von Zucker und Albumin, aber mit kleinen Harnsäurekristallen belastet. Möglicherweise war eine Leberfunktionsstörung aufgrund des übermäßigen Konsums von Süßigkeiten für die Harnsäureablagerungen verantwortlich. Später, im Juni, erhielt ich dank der Freundlichkeit von Dr. A. E. Garrod eine Probe bläulich-grünen Urins von einem neunjährigen Mädchen zusammen mit einer Probe Süßigkeiten, die denen ähnelten, die sie gegessen hatte. Der Urin hatte eine spezifische Dichte von 1022, war sauer und frei von Albumin und Zucker, aber nach dem Stehen bildete sich ein Sediment aus Kalziumoxalatkristallen. (Übersetzt mit Deepl)

showed that the colour was due to methylene blue. The sweets in question were violet or purple coloured, becoming opaque and more reddish on keeping. Three or four pieces swallowed experimentally sufficed to impart a green colour to the urine passed two or three hours afterwards: this green colour was shown by the ordinary tests to be due to methylene blue. In July a woman who attended as an out-patient at the North London Hospital for Consumption told me that her daughter, six years old, had recently had a peculiar affection. During about eight weeks the child from time to time passed greenish urine. The green colour used to be observed for two or three days consecutively every week, and only in the urine passed in the morning. I ascertained that the child had been occasionally eating purple-coloured sweets, though she preferred others when she had the choice. In this case I succeeded in getting some of the purple sweets from the maker. They were similar to those mentioned in the previous case, and after experimentally eating some of them greenish acid urine was excreted, giving the ordinary proofs of the presence of methylene blue. 
I have taken considerable trouble to test the accuracy of various accounts of the characters by which a green or blue colouration of the urine may be recognised as due to methylene blue. Some mistakes in this connexion have been published, but I believe the following summary to be correct. 
1. When a capsule containing one decigramme of methylene blue has been swallowed by a fairly healthy adult the urine passed an hour or so afterwards is already found to have a greenish tint. The urine voided later is deeper green, and still later it is blue. The colour is observed in ihe urine of the next three or four days, but becomes less intense and finally intermittent, the earliest morning urine being the best coloured. In some individuals a green tint may even be observed in the morning urine after five days, though the midday urine of the two preceding days has only the ordinary yellow appearance. This accounts for the history sometimes given that the green colour has been observed chiefly, or exclusively, in the morning urine — that is, in the urine secreted during the night's sleep. Thus when relatively small doses of methylene blue in the form of sweets are taken at intervals during several weeks, as in the third case which I have alluded to, it is not surprising to hear that during eight weeks the green was noticed only in the morning urine.
2. The colour of the urine varies from faint greenish-yellow to deep blue and depends, of course, on the amount of methylene blue and of the ordinary yellowish pigment present In the specimen. The urine quickly stains ordinary white writing- or blotting-paper blue. 
3. The colour of the urine may sometimes be increased by boiling. This is because some of the methylene blue is excreted as a colourless " chromogen." The colour is brought back by heating the urine with acetic acid, as Achard and Castaigne 3 say, or, in acid urine at all events, as I have noted, merely by boiling it. The amount of methylene blue secreted as a colourless chromogen is very much greater in some animals (the dog, the rabbit, and the guinea-pig) than in man, and is increased by the presence of certain pathological conditions in man. 
4. The colour of the urine is slightly lessened by filtering it. This is because part of the methylene blue is absorbed in staining the filter paper, and sometimes also because the urine contains suspended uric acid crystals stained with the blue which cannot pass through the filter paper. 
5. The urine is decolourised by adding a solution of caustic potash without heating. A few drops of nitric acid will not effect this, but decolourisation can generally be effected by boiling with strong nitric or hydrochloric acid. The green or blue can be brought back by neutralisation. 
6. Ether, when shaken up with the urine, does not become coloured, but chloroform takes up much of the dye and rapidly becomes blue. This it will not do with an ordinary aqueous solution of methylene blue. Generally, when shaken up with the latter, chloroform gradually becomes mauve, and afterwards purple or red, causing some diffuse absorption in the green of the spectrum.4 It is probable, however, that the anilin dyes which after passing through the body appear in the urine as methylene blue are not all quite identical with each other — in other words, that there are different varieties of anilin dyes 5 resembling methylene blue which when absorbed from the alimentary canal are excreted in the urine as methylene blue. The blue colouration of chloroform by the methylene blue in the urine does not absolutely prove that the anilin dye has passed through the body, for outside the body ordinary methylene blue if dissolved in any urine, whether freshly passed or otherwise, becomes rapidly capable of giving the characteristic blue colour to chloroform. 
7. On examining the green ur blue urine with a good pocket spectroscope an absorption band can sometimes, but not always, he made out, identical with that yielded by an aqueous solution of methylene blue. The absorption band can, however, be best examined in a pale blue chloroform solution derived from the urine. It is a clearly defined band in the red of the spectrum separated by a considerable space from the sodium band (Frauenhofer D), whereas the characteristic band from a chloroform solution of indigo (and of artificial indigo) is further from the red end of the spectrum and quite close to the sodium band. In more deeply coloured solutions of methylene blue there is a second band in about the position of the indigo band, and in still stronger solutions the two bands united spread out from the red into the yellow and green of the spectrum. If a greenish colour in urine is due to indigo blue the chloroform should take on a bluish tint somewhat different from that due to the presence of methylene blue, and if the chloroform becomes sufficiently coloured the characteristic absorption band of indigo should be detected whilst that of methylene blue should be absent; moreover, when indigo is present the urine is likely to be decomposing and alkaline and by microscopical examination of the sediment the blue granules of the pigment will probably be seen.
6. Methylene blue is reduced and decolourised by the vital action of living organisms. Consequently when urine containing methylene blue begins to ferment the lower portion of the liquid, owing to the action of the reducing microbes, loses its colour and only the upper surface retains it. There the anilin dye forms a thin blue or green film which cannot be decolourised because it is directly exposed to the oxygen of the air. On gently shaking up the liquid and thus mixing it with oxygen the colour may be seen rapidly spreading downwards from the surface until the original appearance of the whole is regained. If the decomposing urine is in a tightly-corked bottle, but does not quite fill it, this beautiful experiment may be repeated several times; but at last all the oxygen in the bottle is used up by the reducing microbes and the urine by reduction entirely loses its colour. Then no amount of shaking will bring back the colour until the cork be withdrawn so no to let out the carbonic acid and admit oxygen. On taking such a bottle of decolourised fermenting urine out of a cupboard and withdrawing the cork and pouring out the liquid into a glass the colour rapidly returns and the erroneous conclusion may be arrived at that it is exposure to light instead of oxygenation which causes the colour to return. Such a mistake has been made, but Achard and Castaigne 7 drew attention to this decolourising effect of living organisms on methylene blue as far back as in 1897. The same action of living tissues explains why the ingestion of a considerable dose of methylene blue scarcely alters the colour of the living human blood and tissues. The methylene blue, until it is excreted by the kidneys, is present in the body as a 

Der gewöhnliche Test ergab, dass die Farbe auf Methylenblau zurückzuführen war. Die fraglichen Süßigkeiten waren violett oder purpurfarben und wurden bei Lagerung undurchsichtig und rötlicher. Drei oder vier Stück, die versuchsweise verschluckt wurden, reichten aus, um dem Urin zwei bis drei Stunden später eine grüne Färbung zu verleihen: Diese grüne Färbung wurde durch die üblichen Tests als auf Methylenblau zurückzuführen identifiziert. Im Juli erzählte mir eine Frau, die als ambulante Patientin im North London Hospital for Consumption behandelt wurde, dass ihre sechsjährige Tochter seit kurzem unter einer seltsamen Erkrankung litt. Etwa acht Wochen lang hatte das Kind von Zeit zu Zeit grünlichen Urin. Die grüne Farbe trat in der Regel zwei bis drei Tage hintereinander jede Woche auf, und zwar nur im morgendlichen Urin. Ich stellte fest, dass das Kind gelegentlich violette Bonbons gegessen hatte, obwohl es andere bevorzugte, wenn es die Wahl hatte. In diesem Fall gelang es mir, einige der violetten Bonbons vom Hersteller zu bekommen. Sie ähnelten denen aus dem vorherigen Fall, und nach dem experimentellen Verzehr einiger Bonbons wurde grünlicher, saurer Urin ausgeschieden, der die üblichen Anzeichen für das Vorhandensein von Methylenblau aufwies.

Ich habe mich sehr bemüht, die Genauigkeit verschiedener Berichte über die Merkmale zu überprüfen, anhand derer eine grüne oder blaue Verfärbung des Urins als Folge von Methylenblau erkannt werden kann. In diesem Zusammenhang wurden einige Fehler veröffentlicht, aber ich halte die folgende Zusammenfassung für richtig.

1. Wenn ein relativ gesunder Erwachsener eine Kapsel mit einem Dezigramm Methylenblau geschluckt hat, weist der etwa eine Stunde später ausgeschiedene Urin bereits eine grünliche Färbung auf. Der später ausgeschiedene Urin ist tiefer grün und noch später blau. Die Färbung ist im Urin der nächsten drei bis vier Tage zu beobachten, wird jedoch weniger intensiv und schließlich intermittierend, wobei der Urin am frühen Morgen die stärkste Färbung aufweist. Bei einigen Personen kann sogar nach fünf Tagen noch eine grüne Färbung im Morgenurin beobachtet werden, obwohl der Mittagsurin der beiden vorangegangenen Tage nur das normale gelbe Aussehen aufweist. Dies erklärt die manchmal angegebene Beobachtung, dass die grüne Farbe hauptsächlich oder ausschließlich im Morgenurin – also im während des Nachtschlafes ausgeschiedenen Urin – festgestellt wurde. Wenn also relativ geringe Dosen von Methylenblau in Form von Bonbons über mehrere Wochen hinweg in Abständen eingenommen werden, wie im dritten Fall, den ich erwähnt habe, ist es nicht verwunderlich, dass acht Wochen lang nur im Morgenurin eine grüne Färbung festgestellt wurde.

2. Die Farbe des Urins variiert von blass grünlich-gelb bis tiefblau und hängt natürlich von der Menge des Methylenblaus und des gewöhnlichen gelblichen Pigments in der Probe ab. Der Urin färbt gewöhnliches weißes Schreib- oder Löschpapier schnell blau.

3. Die Farbe des Urins kann manchmal durch Kochen verstärkt werden. Dies liegt daran, dass ein Teil des Methylenblaus als farbloser „Chromogen” ausgeschieden wird. Die Farbe lässt sich durch Erhitzen des Urins mit Essigsäure wiederherstellen, wie Achard und Castaigne 3 berichten, oder, wie ich festgestellt habe, in saurem Urin in jedem Fall durch einfaches Kochen. Die Menge an Methylenblau, die als farbloses Chromogen ausgeschieden wird, ist bei einigen Tieren (Hund, Kaninchen und Meerschweinchen) viel größer als beim Menschen und wird durch bestimmte pathologische Zustände beim Menschen erhöht.

4. Die Farbe des Urins wird durch Filtrieren leicht abgeschwächt. Dies liegt daran, dass ein Teil des Methylenblaus beim Färben des Filterpapiers absorbiert wird und manchmal auch daran, dass der Urin suspendierte Harnsäurekristalle enthält, die mit dem Blau gefärbt sind und nicht durch das Filterpapier hindurchgehen können.

5. Der Urin wird durch Zugabe einer Lösung von Kalilauge ohne Erhitzen entfärbt. Einige Tropfen Salpetersäure haben keine Wirkung, aber eine Entfärbung kann im Allgemeinen durch Kochen mit starker Salpetersäure oder Salzsäure erreicht werden. Die grüne oder blaue Farbe kann durch Neutralisation wiederhergestellt werden.

6. Äther verfärbt sich beim Schütteln mit dem Urin nicht, aber Chloroform nimmt einen Großteil des Farbstoffs auf und verfärbt sich schnell blau. Bei einer gewöhnlichen wässrigen Lösung von Methylenblau ist dies nicht der Fall. Im Allgemeinen verfärbt sich Chloroform beim Schütteln mit letzterer allmählich mauvefarben und anschließend violett oder rot, was zu einer diffusen Absorption im grünen Bereich des Spektrums führt.4 Es ist jedoch wahrscheinlich, dass die Anilinfarbstoffe, die nach der Passage durch den Körper als Methylenblau im Urin erscheinen, nicht alle völlig identisch sind – mit anderen Worten, dass es verschiedene Arten von Anilinfarbstoffen gibt, die Methylenblau ähneln und nach der Absorption aus dem Verdauungstrakt als Methylenblau im Urin ausgeschieden werden. Die blaue Färbung von Chloroform durch das Methylenblau im Urin beweist nicht zwingend, dass der Anilinfarbstoff den Körper passiert hat, denn außerhalb des Körpers kann gewöhnliches Methylenblau, wenn es in Urin gelöst wird, unabhängig davon, ob dieser frisch ausgeschieden wurde oder nicht, Chloroform schnell die charakteristische blaue Farbe verleihen.

7. Bei der Untersuchung des grün-blauen Urins mit einem guten Taschenspektrometer lässt sich manchmal, aber nicht immer, eine Absorptionsbande erkennen, die mit der einer wässrigen Lösung von Methylenblau identisch ist. Die Absorptionsbande lässt sich jedoch am besten in einer hellblauen Chloroformlösung aus dem Urin untersuchen. Es handelt sich um eine klar definierte Bande im roten Bereich des Spektrums, die durch einen beträchtlichen Abstand von der Natriumbande (Frauenhofer D) getrennt ist, während die charakteristische Bande einer Chloroformlösung von Indigo (und von künstlichem Indigo) weiter vom roten Ende des Spektrums entfernt und ganz in der Nähe der Natriumbande liegt. In stärker gefärbten Lösungen von Methylenblau gibt es eine zweite Bande etwa an der Position der Indigobande, und in noch stärkeren Lösungen vereinigen sich die beiden Banden und breiten sich vom roten in den gelben und grünen Bereich des Spektrums aus. Wenn eine grünliche Färbung des Urins auf Indigoblau zurückzuführen ist, sollte das Chloroform eine bläuliche Färbung annehmen, die sich etwas von der durch das Vorhandensein von Methylenblau verursachten Färbung unterscheidet, und wenn das Chloroform ausreichend gefärbt ist, sollte die charakteristische Absorptionsbandbreite von Indigo nachweisbar sein, während die von Methylenblau fehlen sollte; Außerdem ist der Urin bei Vorhandensein von Indigo wahrscheinlich in Zersetzung begriffen und alkalisch, und bei mikroskopischer Untersuchung des Sediments sind wahrscheinlich die blauen Pigmentkörnchen zu sehen.

6. Methylenblau wird durch die Lebensaktivität lebender Organismen reduziert und entfärbt. Wenn also methylenblauhaltiger Urin zu gären beginnt, verliert der untere Teil der Flüssigkeit aufgrund der Wirkung der reduzierenden Mikroben seine Farbe, während die obere Oberfläche sie behält. Dort bildet der Anilinfarbstoff einen dünnen blauen oder grünen Film, der nicht entfärbt werden kann, da er direkt dem Sauerstoff der Luft ausgesetzt ist. Durch leichtes Schütteln der Flüssigkeit und damitiges Vermischen mit Sauerstoff kann man beobachten, wie sich die Farbe schnell von der Oberfläche nach unten ausbreitet, bis das ursprüngliche Aussehen wiederhergestellt ist. Befindet sich der zersetzende Urin in einer fest verschlossenen Flasche, die jedoch nicht ganz gefüllt ist, kann dieses schöne Experiment mehrmals wiederholt werden; schließlich wird jedoch der gesamte Sauerstoff in der Flasche von den reduzierenden Mikroben verbraucht und der Urin verliert durch Reduktion vollständig seine Farbe. Dann kann die Farbe durch kein Schütteln zurückgebracht werden, bis der Korken entfernt wird, damit die Kohlensäure entweichen und Sauerstoff eindringen kann. Nimmt man eine solche Flasche mit entfärbtem fermentierendem Urin aus einem Schrank, entfernt den Korken und gießt die Flüssigkeit in ein Glas, kehrt die Farbe schnell zurück, und man könnte zu der falschen Schlussfolgerung gelangen, dass nicht die Sauerstoffzufuhr, sondern die Lichteinwirkung die Ursache für die Rückkehr der Farbe ist. Ein solcher Fehler wurde gemacht, aber Achard und Castaigne 7 haben bereits 1897 auf diesen Entfärbungseffekt lebender Organismen auf Methylenblau hingewiesen. Die gleiche Wirkung lebender Gewebe erklärt, warum die Einnahme einer beträchtlichen Dosis Methylenblau die Farbe des lebenden menschlichen Blutes und Gewebes kaum verändert. Das Methylenblau ist, bis es über die Nieren ausgeschieden wird, im Körper als (Übersetzt mit DeepL)

colourless chromogen — that is to say, in its reduced form. Dr. L. Hill has made use of the dye to show how oxygen is used up by cerebral work, the methylene blue being reduced and decolourised by the activity of the brain substance. 
Naturally the deodourisation of green urine beginning to ferment may be delayed or prevented by boiling it or adding glacial acetic acid, or chloroform, or any antiseptic preservative substances. The following experiment well illustrates the action of living organisms on methylene blue. If to a weak solution of sugar coloured by methylene blue a little yeast is added the blue colour gradually disappears from the lower layers of the liquid as fermentation progresses. When the sugar is used up fermentation ceases and the blue colour returns, because the yeast cells though still alive have nothing to do. When, however, fresh sugar is added the yeast cells regain their activity and reduce the methylene blue to the state of a colourless chromogen. 
The questien of green urine from eating coloured sweets is not without its practical importance, for a suspicion of the true cause may save a good deal of time and possibly some anxiety. A medical man when be prescribes methylene blue should not forget, for obvious reasons, to warn the patient of the effect of the drug on the urine, and vendors of sweets, as they can hardly converse with their customers on urinary topics, ought certainly never to sell any sweets, containing the colouring matter in question. 
Though fuchsin, when given as medicine — as it frequently was some years back for renal affections — quickly reddens the urine I have never heard of a case in which the urine has been thus coloured from eating red sweets. Probably, therefore, fuchsin is not employed as one of the substitutes for cochineal. An eosin-like anilin dye is, however, sometimes employed for sweets. In 1896 the urine of a child just admitted to the German Hospital was found to be markedly fluorescent, somewhat like a weak solution of eosin, appearing pink by transmitted light end golden green when viewed against a black background. About three days after admission the urine was slightly acid and of specific gravity 1020 and still looked greenish-yellow against a black background, though the pink colour by transmitted light had disappeared. Dr. A. E. Garrod kindly told me of a similar case from eating anilin-dyed sweets and I obtained samples of coloured sweets which the child had partaken of just before admission to the hospital. Amongst them were pink discs like "musk-dropa" or "rose-drops," and these when dissolved in water yielded a solution fluorescent like the child's urine. The child had doubtless eaten very many of the sweets, for a few only seem not to colour the urine. This is probably why similar urine is seldom observed. 
Harley-street. W. 

Das Methylenblau ist, bis es über die Nieren ausgeschieden wird, als farbloses Chromogen – also in seiner reduzierten Form – im Körper vorhanden. Dr. L. Hill hat den Farbstoff verwendet, um zu zeigen, wie Sauerstoff durch die Gehirnarbeit verbraucht wird, wobei das Methylenblau durch die Aktivität der Gehirnsubstanz reduziert und entfärbt wird.

Natürlich kann die Desodorierung von grünem, zu gären beginnendem Urin durch Kochen oder Zugabe von Eisessig, Chloroform oder anderen antiseptischen Konservierungsstoffen verzögert oder verhindert werden. Das folgende Experiment veranschaulicht gut die Wirkung lebender Organismen auf Methylenblau. Wenn man einer schwachen, mit Methylenblau gefärbten Zuckerlösung etwas Hefe zusetzt, verschwindet die blaue Farbe mit fortschreitender Gärung allmählich aus den unteren Schichten der Flüssigkeit. Wenn der Zucker aufgebraucht ist, hört die Gärung auf und die blaue Farbe kehrt zurück, da die Hefezellen zwar noch leben, aber nichts mehr zu tun haben. Wenn jedoch frischer Zucker hinzugefügt wird, werden die Hefezellen wieder aktiv und reduzieren das Methylenblau zu einem farblosen Chromogen.

Die Frage nach grünem Urin nach dem Verzehr von gefärbten Süßigkeiten ist nicht ohne praktische Bedeutung, denn ein Verdacht auf die wahre Ursache kann viel Zeit und möglicherweise auch Ängste sparen. Ein Arzt, der Methylenblau verschreibt, sollte aus offensichtlichen Gründen nicht vergessen, den Patienten auf die Wirkung des Medikaments auf den Urin hinzuweisen, und Süßigkeitenverkäufer, die mit ihren Kunden kaum über Urinprobleme sprechen können, sollten auf keinen Fall Süßigkeiten verkaufen, die den fraglichen Farbstoff enthalten.

Obwohl Fuchsin, wenn es als Medikament verabreicht wird – wie es vor einigen Jahren häufig bei Nierenleiden der Fall war –, den Urin schnell rot färbt, habe ich noch nie von einem Fall gehört, in dem der Urin durch den Verzehr roter Süßigkeiten so gefärbt wurde. Daher wird Fuchsin wahrscheinlich nicht als Ersatz für Cochenille verwendet. Ein eosinähnlicher Anilinfarbstoff wird jedoch manchmal für Süßigkeiten verwendet. Im Jahr 1896 wurde der Urin eines gerade in das Deutsche Krankenhaus aufgenommenen Kindes als deutlich fluoreszierend festgestellt, ähnlich einer schwachen Eosinlösung, die im Durchlicht rosa und vor einem schwarzen Hintergrund goldgrün erschien. Etwa drei Tage nach der Aufnahme war der Urin leicht sauer und hatte eine spezifische Dichte von 1020 und sah vor einem schwarzen Hintergrund immer noch grünlich-gelb aus, obwohl die rosa Farbe im durchscheinenden Licht verschwunden war. Dr. A. E. Garrod berichtete mir freundlicherweise von einem ähnlichen Fall nach dem Verzehr von mit Anilin gefärbten Süßigkeiten, und ich erhielt Proben der gefärbten Süßigkeiten, die das Kind kurz vor der Einlieferung ins Krankenhaus gegessen hatte. Darunter befanden sich rosa Scheiben wie „Moschus-Tropfen” oder „Rosentropfen”, die, wenn sie in Wasser aufgelöst wurden, eine fluoreszierende Lösung ergaben, die dem Urin des Kindes ähnelte. Das Kind hatte zweifellos sehr viele dieser Süßigkeiten gegessen, denn nur wenige scheinen den Urin nicht zu verfärben. Dies ist wahrscheinlich der Grund, warum ähnlicher Urin selten beobachtet wird.

Harley-Street. W. (übersetzt mit Deepl)

1. Harn-Analyse, p. 54, quoted by Dr. H. Morley Fletcher. Transactions on the Clinical Society of London 1899, vol. xxxii., p49. 2 There is no doubt that oxaluria may sometimes be regarded as a forerunner of alimentary glycosurio - that is, as being due to the same kind of metabolic disturbance wich when more pronounced reveals itself by the presence of sugar in the urine. See Dr. Paul Meyers' excellent paper "Über unvollkommene Zuckeroxydarion im Organismus," Deutsche Medicinische Wochenschrif 1901, No. 16 and 17. It is possible however, that a dose of pure methylene blue without sugar ma in some individuals produce or increase oxyluria. 3 Sur la Décoloratioa du Bleu de Méthylène par les Èlements Vivant. Compte. rendus de la Societè de Biologie. Paris, 1897. p. 1091.  4. By spectroscopic examination of he reddish chloroform a methylene blue absorption band can sometimes also he made out. 5. At all events I and that chloroform when added to an aqueous solution of the purple sweets (from the third case mentioned previously) remains uncoloured, though It takes on mauve or purple colour when shaken up with an aqueous solution of ordinary methylene blue. Yet the green urine obtained by eating these sweets gives the characteristic blue colour to chloroform, just as does any green urine from the medicinal use of Methylene blue. Moreover, on dissolving some of the sweets in a glass of urine and adding chloroform the latter at once becomes blue.  6. I am indebted to Mr. J. Good of Stockport for an example of such urine. It was from an old lady, aged 68 years, who said that it was bright green when voided and that she had never noticed her urine of that colour before. When I examined the specimen, about ten days afterwards, it still had a greenish colour, but was turbid, alkaline, and decomposing, and there was a bluish sediment in which blue granules could be seen under the microscope, as well as some triple phosphate crystals, Ac. Chloroform shaken up with the sediment took on a faint blue colouration. This was intensified by heating and evaporating off part of the chloroform, and then to spectroscopic enamination the characteristic absorption band of indigo blue was observed. This case is, of course, not the one described by Mr. Good in THLANCET of June 1st (p. 15361 and August 314 ,p. 617). 1901, in which he found after all that the colour of the urine was due to methylene blue.  7. Achant and Castaigne. loc. cit.     

1. Harn-Analyse, S. 54, zitiert von Dr. H. Morley Fletcher. Transactions on the Clinical Society of London 1899, Band xxxii., S. 49.

2 Es besteht kein Zweifel, dass Oxalurie manchmal als Vorläufer einer alimentären Glykosurie angesehen werden kann – das heißt, als Folge derselben Stoffwechselstörung, die sich in ausgeprägterer Form durch das Vorhandensein von Zucker im Urin bemerkbar macht. Siehe die ausgezeichnete Abhandlung von Dr. Paul Meyers „Über unvollkommene Zuckeroxydarion im Organismus“, Deutsche Medizinische Wochenschrift 1901, Nr. 16 und 17. Es ist jedoch möglich, dass eine Dosis reines Methylenblau ohne Zucker bei manchen Personen Oxylurie hervorruft oder verstärkt.

3 Sur la Décoloratioa du Bleu de Méthylène par les Èlements Vivant. Compte. rendus de la Societè de Biologie. Paris, 1897. S. 1091.

4. Bei spektroskopischer Untersuchung des rötlichen Chloroform kann manchmal auch eine Absorptionsbande von Methylenblau festgestellt werden.

5. Auf jeden Fall bleibt dieses Chloroform, wenn es einer wässrigen Lösung der violetten Bonbons (aus dem zuvor erwähnten dritten Fall) zugesetzt wird, farblos, nimmt jedoch eine malvenfarbene oder violette Färbung an, wenn es mit einer wässrigen Lösung von gewöhnlichem Methylenblau geschüttelt wird. Der durch den Verzehr dieser Bonbons erhaltene grüne Urin verleiht dem Chloroform jedoch die charakteristische blaue Farbe, genau wie jeder grüne Urin, der durch die medizinische Verwendung von Methylenblau entsteht. Außerdem färbt sich Chloroform sofort blau, wenn man etwas von den Bonbons in einem Glas Urin auflöst und Chloroform hinzufügt.

6. Ich bin Herrn J. Good aus Stockport für ein Beispiel für solchen Urin zu Dank verpflichtet. Er stammte von einer 68-jährigen Dame, die angab, dass er beim Wasserlassen hellgrün war und sie ihren Urin noch nie zuvor in dieser Farbe gesehen hatte. Als ich die Probe etwa zehn Tage später untersuchte, hatte sie immer noch eine grünliche Farbe, war jedoch trüb, alkalisch und in Zersetzung begriffen, und es gab einen bläulichen Niederschlag, in dem unter dem Mikroskop blaue Körnchen sowie einige Triphosphatkristalle zu sehen waren. Mit dem Niederschlag vermischtes Chloroform nahm eine schwache blaue Färbung an. Diese wurde durch Erhitzen und Verdampfen eines Teils des Chloroforms verstärkt, und bei der spektroskopischen Untersuchung wurde die charakteristische Absorptionsbande von Indigoblau beobachtet. Dieser Fall ist natürlich nicht derjenige, den Herr Good in THLANCET vom 1. Juni (S. 15361 und 31. August, S. 617) beschrieben hat. 1901 stellte er schließlich fest, dass die Farbe des Urins auf Methylenblau zurückzuführen war.

7. Achant und Castaigne. loc. cit.

(Übersetzt mit Deepl)

Bisher war die Struktur dieser Kombination unbekannt.

“Über die Strukturformel yon Argochrom liegen keine näheren Angaben vor. Man nimmt an, dass jeweils zwei Methylenblau-Moleküle komplex über zwei Ag+- Ionen gebunden sind.”1

Die Antwort auf die Frage, was Argochrom war, könnte eine Arbeit aus einem ganz anderen Gebiet geben.2

Eigentlich geht es in dieser Arbeit um Methodenentwicklung.

“ Diese Methode lässt sich unter anderem leicht anwenden, um sowohl die Selektivität von Abwasserreinigungsmembranen für relevante kleinmolekulare Schadstoffe als auch die photokatalytische Wirksamkeit solcher Membranen für den Abbau relevanter Schadstoffe durch quantitative Bewertung im Permeat in sehr geringen Konzentrationsbereichen zu untersuchen.”3

ABER

man hat Quantitative oberflächenverstärkte Resonanz-Raman-Streuungsanalyse von Methylenblau unter Verwendung von Silberkolloid betrieben, was in gewisser Weise Argochrom ist, auch wenn nicht die exakten Verhältnisse von Silber zu MB von damals verwendet werden.4

Leider habe ich von Ramanspektroskopie so gar keine Ahnung und kann nur einige Dinge herauspicken, die ich soweit verstehe, also normale UV/VIS-Spektren.

Die Publikation hat auch das bisher beste Absorptionsspektrum von Methylenblau, das ich bisher finden konnte.

“ABBILDUNG 1 Absorptionsspektren der UV-Vis-Spektroskopie von wässrigen Lösungen von Methylenblau in verschiedenen Konzentrationen. Einfügung: Kalibrierungskurve der Absorption gegenüber der Konzentration, extrahiert aus den Spektren.”

MB absorbiert zwischen 450 nm bis 725 nm, man sieht es nur erst in entsprechend hohen Konzentrationen. Das erklärt auch alte Beobachtungen, dass die Fotoaktivierung von MB bei Krebs nicht funktioniert hat, wenn Kleidung über der betroffenen Stelle war. Der für Krebs verantwortliche Bereich liegt vielleicht im sichtbaren Spektrum?

5

Wenn man MB mit Silberkolloid mischt, verschiebt sich die Absorption zum Spektrum von kolloidalem Silber hin. Addiert man NaCl (z. Bsp. durch Infusionslösung bzw. NaCl im Blut) verschiebt sie die Absorption erneut.

Sowohl kolloidales Silber als auch MB sind fotoaktivierte Substanzen, MB fluoresziert nach alten Dokumenten sogar.

Das ist keine einfache Mischung, die Substanzen interagieren miteinander.

“ABBILDUNG 2 Absorptionsspektren von Silberkolloid (schwarze durchgezogene Linie), Silberkolloid mit dem Analyten Methylenblau (MB) –10^−7 M (grüne gepunktete Linie), aggregiertem Silberkolloid mit 100 μl NaCl 1 M (blaue gepunktete Linie) und dem resultierenden Absorptionsspektrum nach Zugabe von MB (rote fette durchgezogene Linie). Das Spektrum von MB-10^−7 M (rosa Linie) ist ebenfalls enthalten, wobei ein Pfeil die Hauptabsorptionsbandmaxima von MB bei 664 nm anzeigt

Wie Argochrom aussehen könnte, findet man nicht in der Publikation selbst, sondern nur in der Vorschau, die Telegram erzeugt, wenn man den Link zur Publikation teilt.

Keine Ahnung, warum dieses Bild, das alles so schön erklärt, sonst nicht zu finden ist.

Wobei wir wieder bei der Vermutung aus dem Jahr 1968 vom Anfang des Artikels sind:

“Über die Strukturformel yon Argochrom liegen keine näheren Angaben vor. Man nimmt an, dass jeweils zwei Methylenblau-Moleküle komplex über zwei Ag+- Ionen gebunden sind.”6

Sieht wohl eher nach zwei Silberatomen auf ein Methylenblau aus.

Die Zeit Nr. 2638, 28. Januar 1910, S. 121

“Die Inhalationen bei Lungenleiden. Die Inhalationstherapie spielt heutigentags bei der Behandlung der Lungentuberkulose nur mehr eine sehr kleine Rolle. In letzter Zeit haben sich insbesondere Brühl und Sänger vollkommen ablehnend dagegen ausgesprochen. Seit dem bekannten Versuch v. Schrötters, der einen Hund Methylenblau inhalieren ließ und die Farbe dann bis in die Alveolen nachweisen konnte, kann man aber in der Möglichkeit, Medikamente in die tieferen Teile des Respirationstraktus zu bringen, nicht zweifeln. Zweifelhaft muss es trotzdem erscheinen, ob man die Medikamente in genügender Menge einbringen kann, ohne dabei die normalen Partien der Lunge zu schädigen. Versuche mit verschiedenen Medikamenten wurden gemacht, denen geradezu spezifische Wirkung zugesprochen wurde (Lignosulfit, Igazol, Sanosin), meist aber sehr bald wieder verlassen. Nicht zu leugnen ist der recht günstige symptomatische Wert der Inhalationen in einzelnen Fällen.”

Wiener Medizinische Wochenschrift Nr. 12, 1892, S. 470f2

“Über die Verwendung von Anilinfarbstoffen bei Nasen-, Hals- und Ohrenleiden.

In der Nase verwendet er jetzt ausschließlich Methylenblau med, und zwar in Lösung von 0.30: 20.0 Wasser und in Pulverform. Die mit Pyoktaninwatte umwickelte Sondenspitze wird zuerst in die Lösung und dann in das Pulver getaucht; alsdann wird die mit dem Brenner gesetzte Brandwunde gehörig eingerieben. Dies muss täglich wiederholt werden, bis die betreffende Nasenseite ganz frei bleibt. Nachher finden Einstäubungen von Sozojodol-Natrium statt. Wenn die Nasenhöhle nicht durch Gerüstverbindungen verengt ist, so bleibt die gebrannte oder geätzte Seite vom ersten Tage ab mehr oder weniger frei. Verkrümmungen der Nasenscheidewand müssen sogleich oder in den ersten Tagen beseitigt werden (mit dem Meissel). Ist der Nasenluftweg frei genug, so bilden sich unter Methylenblaubehandlung keine croupösen Häute in der Nase. Schon nach 8 Tagen, bei verengten Nasen nach 10—14, kann die andere Nasenseite gebrannt werden. Die Beschwerden sind in einfachen Fällen gleich Null, in schwierigeren gegen früher ungemein vermindert. Wozu man früher Monate gebrauchte, bedarf man jetzt nur noch Wochen. Die Anwendung der Anilinfarbstoffe erfordert aber große Übung und Geschicklichkeit. Tuberkulöse und lupöse Geschwüre werden in gleicher Weise mit bestem Erfolge behandelt. Ferner erwiesen sich Einblasungen von Methylenblau 3:10 Sozojodol-Natrium bei übelriechenden Dauerentzündungen der Nase (Ozaena Simplex) von sehr gutem Erfolge. Es muss die Einstäubung jedoch mittelst Kabierske-Bresgen’schem Pulverbläser geschehen. — In der Rachenhöhle erwies sich die Anwendung des Methylenblau in Pulverform wie auch des Hexaethylvioletts an eine Sonde angeschmolzen bei Tuberkulose und Lupus äußerst wirksam. Gegen die eitrige Erkrankung der mittleren Spalte wurde das Hexaäthylviolett mit bestem Erfolge angewendet. Das letztere ist erheblich besser als das Hexamethylviolett (Pyoktanin), weil es sich besser löst und größere Färbekraft besitzt. Im Kehlkopfe wurde es bei der sogenannten trockenen Entzündung, die mit Krustenbildung einhergeht, in Lösung von 030 : 250 mittelst Wattebausch (Krause’s Watteträger) erfolgreich verwendet; gegen tuberkulöse Geschwüre wird es an einer Sonde angeschmolzen gebraucht. Bei Mittelohreiterungen leichten Grades erwies sich das Einbringen obiger Lösung von Methylenblau und Hexaethylviolett sehr wirksam, jedoch nicht auffällig mehr als auch bei der gewohnten Borsäurebehandlung. In drei sehr alten und jeder Behandlung seither Widerstand leistenden Fällen wurde durch Einbringen einer kleinen Menge reinen Hexaethylvioletts sofortige Beseitigung der Eiterung erzielt. Die Anilinfarbstoffe müssen vor allen Dingen rein sein, die von B. verwendeten stammen aus der Fabrik „Höchster Farbwerke vorm. Meister Lucius und Brüning“. Eine ausführliche Darstellung des Verfahrens und der gemachten Beobachtungen findet man in einer unter gleichem Titel in dem medizinischen Verlage von Eduard Jungklaas in Wiesbaden erschienenen Schrift.”